Histamine Detection in Mackerel (Scomberomorus Sp.) and its Products Derivatized with 9-Flourenilmethylchloroformate

Histamine is commonly present in food containing proteins, like in mackerel. Consuming fish is imperative for the improvement of human muscles. Nevertheless, some studies reported ingesting fish containing histamine more than 50 mg·kg-1 can cause toxicity. This study analyzed and determined the composition of histamine in mackerel and its products commonly consumed in Malaysia, especially on the East Coast of Malaysia. These included processed mackerel such as canned products, satay (skewed fish) and keropok lekor (fish cake/ cracker). Histamine analysis was performed using High Performance Liquid Chromatography (HPLC) equipped with a fluorescence detector. A derivatizing reaction was applied to increase the sensitivity of HPLC to histamine using 9-flourenilmethylchloroformate (FMOC-Cl). The chromatographic separation was achieved in 15 min. Method validation was in accordance to Commission Decision 657/2002/CE. The linear range was at 0.16 – 5.00 µg·mL-1 (histamine) with the LOD at 0.10 µg·mL-1 and LOQ at 0.30 µg·mL-1 . Method applicability was checked on seven real samples involving raw, cooked, and dry products, yielding acceptable recovery.

LC-MS/MS Determination of 21 Non-Steroidal Anti-Inflammatory Drugs Residues in Animal Milk and Muscles

The presented procedure combines experience from two LC-MS/MS methods previously developed by our team for NSAIDs determination in meat and milk. The novelty was a modification of sample preparation and combining LC-MS/MS method for milk and muscle. The clean-up procedure was investigated, leading to a change from SPE to dSPE with C18 bulk sorbent. Unlike most of the existing methods, chromatographic separation was achieved on a C8 chromatographic column. This method was developed and validated under European Commission Decision 2002/657/EC. Recovery for milk samples values between 86.3% to 108%, with the coefficient of variation, varied from 5.51% to 16.2%. The recovery for muscle was calculated to be between 85.0% and 109%, and the coefficient of variation was—4.73% to 16.6%. The validation results prove that the method is suitable for confirmatory purposes in milk and muscle. Of 452 samples tested in 2019 and 2020, two have been identified as non-compliant.

‘No magic number’ means ‘no magic number’: will the EU Court turn the tide on four-to-three mobile mergers in Europe?

This article explores the impact of the General Court's judgment in CK Telecoms and the Commission decision in T-Mobile NL/Tele2 on the assessment of four-to-three mobile mergers. The unconditional clearance in the Dutch case energized some telecoms executives, but the Commission stressed that it was largely due to the very specific circumstances of the case. Then, in CK Telecoms, the General Court delivered a blow to the framework developed by the Commission to assess mobile mergers. The Court's interpretation of the concepts of ‘important competitive force’ and ‘closeness of competition’ raises the threshold for the Commission to challenge mergers and implements the principle that there is no ‘magic number’ of mobile network operators. Though some commentators compared CK Telecoms to the Airtours case, CK Telecoms has not provoked similar soul-searching at DG Competition. Some senior Commission officials criticized the judgment and indicated that the Commission will continue applying the same framework. On appeal, the Commission has challenged all key aspects of the judgment. The Dutch case, however, confirms that the Commission may entertain unconditional clearance in some four-to-three mobile mergers and, while CK Telecoms might not bring an overhaul of the current framework, we can expect some refinements.

Is the ecological status assessment result the same using genomic- and morphology-based benthic biotic indices?

Monitoring and assessment of benthic communities have been routinely undertaken using morphology-based benthic indices, among which AZTI’s Marine Biotic Index (AMBI) and multivariate-AMBI (M-AMBI), are the most successful worldwide (Borja et al., 2019). They are used officially in routine monitoring in many European countries, where they have been intercalibrated (European Commission, 2018). AMBI has been mirrored by metabarcoding, and the genomic version (gAMBI; Aylagas et al., 2014) has demonstrated to yield results comparable to the morphological version. However, we have so far failed to develop a reliable genomic version of M-AMBI (M-gAMBI), which includes gAMBI, richness and diversity (Aylagas et al., 2018). This is because richness and diversity present very different results in morphological and genomic analyses. Since the multivariate method needs reference conditions, these must be set specifically for M-gAMBI to make its results comparable to those obtained with M-AMBI. To this aim, we started annual surveys in 2018, in 22 sampling locations, in Basque estuaries and coast. We present the results from the first three years of these surveys and discuss the problems faced when developing genomic reference conditions for M-gAMBI. The findings are of paramount importance for managers, since any new method or modification of an existing assessment method, needs to demonstrate that the results obtained when assessing the status are similar to those morphological-based methods, already approved and intercalibrated. Aylagas, E., Á. Borja, N. Rodríguez-Ezpeleta, 2014. Environmental Status Assessment Using DNA Metabarcoding: Towards a Genetics Based Marine Biotic Index (gAMBI). PLoS ONE, 9: e90529. Aylagas, E., Á. Borja, I. Muxika, N. Rodríguez-Ezpeleta, 2018. Adapting metabarcoding-based benthic biomonitoring into routine marine ecological status assessment networks. Ecological Indicators, 95: 194-202. Borja, A., G. Chust, I. Muxika, 2019. Chapter Three - Forever young: The successful story of a marine biotic index. Advances in Marine Biology, 82: 93-127. European Commission, 2018. Commission Decision (EU) 2018/229 of 12 February 2018 establishing, pursuant to Directive 2000/60/EC of the European Parliament and of the Council, the values of the Member State monitoring system classifications as a result of the intercalibration exercise and repealing Commission Decision 2013/480/EU. Official Journal of the European Communities, L47: 1-91.

Can Kosovo be considered as a ‘third country’ in the meaning of EU law? Case note to Spain v. Commission

The question of the recognition of the independence of Kosovo has been a dividing factor among Member States for more than a decade. Never before, however, had it led to an action for annulment before European courts. In Spain v. Commission, the Kingdom of Spain challenged the validity of a Commission decision providing for the participation of Kosovo’s national regulation authority in the Body of European Regulators for Electronic Communications (BEREC). The General Court ruled that the Commission could consider Kosovo as a third country in order to provide for the participation of its national regulation authority in BEREC. The Commission could also rely on the Stabilisation and Association Agreement concluded between the EU and Kosovo in order to enhance such cooperation. This judgment is of particular importance in terms of both EU-Kosovo relations and participation of third countries in EU agencies.

Development of analytical methods for the HPLC-based determination of sulfonamides after microextraction with novel (nano)materials

Τα αντιβιοτικά είναι ευρέως διαδεδομένα για τις θεραπευτικές τους ιδιότητες. Ωστόσο, τα τελευταία χρόνια εκφράζονται ανησυχίες σχετικά με την ύπαρξή τους στο περιβάλλον και στα τρόφιμα. Για να περιοριστεί το πρόβλημα, οι νομοθετικές αρχές έχουν θεσπίσει ανώτατα επιτρεπτά όρια για τα περισσότερα αντιβιοτικά. Τα σουλφοναμίδια (sulfonamides, SAs) είναι η πρώτη κατηγορία εμπορικά διαθέσιμων αντιβιοτικών και παραμένουν από τις πιο δημοφιλείς. Αυτός είναι και ο λόγος για τον οποίο αναπτύσσονται πολλές αναλυτικές μέθοδοι για τον προσδιορισμό τους. Στο πλαίσιο της παρούσας διδακτορικής διατριβής, αναπτύχθηκαν τέσσερα (νανο)υλικά και χρησιμοποιήθηκαν σε τεχνικές προκατεργασίας δείγματος, προκειμένου να γίνει εκχύλιση των SAs από περιβαλλοντικά δείγματα και δείγματα τροφίμων και κατά συνέπεια, προέκυψαν τέσσερις νέες αναλυτικές μέθοδοι. Πραγματοποιήθηκε διαχωρισμός των SAs χρησιμοποιώντας υγρή χρωματογραφία (HPLC) και η ταυτοποίηση/ποσοτικοποίηση των ενώσεων επετεύχθη με έναν ανιχνευτή συστοιχίας διόδων (diode array detector). Τα σουλφοναμίδια τα οποία εξετάστηκαν είναι τα εξής: σουλφακεταμίδιο, σουλφαθειαζόλη, σουλφαδιαζίνη, σουλφαπυριδίνη, σουλφαμεραζίνη, σουλφαμεθαζίνη, σουλφαμεθοξυπυριδαζίνη, σουλφαχλωροπυριδαζίνη, σουλφαμεθοξαζολη, σουλφαδιμεθοξινη, σουλφισοξαζολη, και σουλφακινοξαλινη. Για την ανάπτυξη της πρώτης μεθόδου, σπόγγοι μελαμίνης τροποποιήθηκαν με γραφένιο (graphene-modified melamine sponges, GMeS) και χρησιμοποιήθηκαν ως προσροφητικό υλικό. Οι τροποποιημένοι σπόγγοι μελαμίνης παρασκευάστηκαν με μια απλή διαδικασία που ολοκληρώθηκε σε ένα στάδιο και η οποία όχι μόνο είναι σύμφωνη με τις αρχές τις πράσινης Χημείας, αλλά πλεονεκτεί σε σχέση με προηγούμενες μεθόδους που αναφέρονται στη βιβλιογραφία σε σχέση με τη σύνθεση τροποποιημένων σπόγγων μελαμίνης με γραφένιο. Μελετήθηκε η καταλληλότητα των GMeS για την εκχύλιση των SAs και αναπτύχθηκε μια αναλυτική μέθοδος για τον προσδιορισμό τους σε δείγματα γάλακτος, αυγών και νερού λίμνης. Η μέθοδος που αναπτύχθηκε επικυρώθηκε σύμφωνα με την οδηγία SANCO/12571/2013 και αποδείχθηκε ότι είναι ακριβής και επαναλήψιμη, ενώ τα όρια ποσοτικοποίησης είναι χαμηλά (0,31-0,91 μg/kg, 0,96-1,32 μg/kg και 0,10-0,29 μg/L για τα δείγματα γάλακτος, αυγών και νερού λίμνης, αντίστοιχα). Επιπλέον, δεν παρατηρήθηκε σημαντική επίδραση από τα μελετούμενα υποστρώματα, καθώς η τεχνική μικροεκχύλισης που αναπτύχθηκε λειτουργεί και ως στάδιο καθαρισμού. Το χαμηλό κόστος, η φιλική προς το περιβάλλον σύνθεση και οι υψηλές ανακτήσεις είναι μερικά ακόμα από τα πλεονεκτήματα της μεθόδου που αναπτύχθηκε. Για την ανάπτυξη της δεύτερης μεθόδου τροποποιήθηκαν σπόγγοι μελαμίνης με μεταλλικά φύλλα χαλκού (CuMeS). Οι CuMeS παρασκευάστηκαν με μια γρήγορη διαδικασία που ολοκληρώθηκε σε ένα στάδιο (χωρίς τη δημιουργία οξειδίων του χαλκού) και χρησιμοποιήθηκαν για την ανάπτυξη μιας ευαίσθητης και εκλεκτικής μεθόδου προκατεργασίας για την εκχύλιση SAs από δείγματα γάλακτος και νερού λίμνης. Η επιφάνεια των παρασκευασμένων CuMeS, μετά τη ξήρανσή τους καθίσταται υδρόφοβη, γεγονός που επιτρέπει την ανάπτυξη υδρόφοβων αλληλεπιδράσεων. Επιπλέον, είναι η πρώτη φορά που αξιοποιείται η μεγάλη συγγένεια του χαλκού για τα SAs στην αναλυτική χημεία. Λόγω της μεγάλης εκλεκτικότητας, η μέθοδος που αναπτύχθηκε αποτελεί τόσο ένα βήμα εκχύλισης, όσο και ένα βήμα καθαρισμού για τον ποσοτικό προσδιορισμό των SAs. Η αναλυτική μέθοδος έχει ευρεία γραμμική περιοχή (η οποία περιλαμβάνει συγκεντρώσεις μεγαλύτερες και μικρότερες από το ανώτατο επιτρεπτό όριο που έχει θεσπιστεί για τα SAs), χαμηλά όρια ποσοτικοποίησης (0,025–0,057 μg/L για δείγματα νερού λίμνης και 0,23–1,05 μg/L για δείγματα γάλακτος), ιδιαίτερα ικανοποιητικές ανακτήσεις και καλή αναπαραγωγιμότητα. Η μέθοδος επικυρώθηκε σύμφωνα με την απόφαση Commission Decision 657/2002/EC. Η τρίτη μέθοδος αποτελεί μια βελτιωμένη παραλλαγή της μικροεκχύλισης διασποράς υγρού-υγρού με χρήση μαγνητικών ιοντικών υγρών. Η διαδικασία συνδυάζει ένα αδιάλυτο στο νερό υποστηρικτικό υλικό και το ιοντικό υγρό [P66614+][Dy(III)(hfacac)4-] και μέσω της μεταβολής pH στο ίδιο δείγμα επιτρέπει την ταυτόχρονη μικροεκχύλιση των SAs και των τριαζινών. Το στερεό υπόστρωμα αναμιγνύεται με το μαγνητικό ιοντικό υγρό προκειμένου να ξεπεραστούν οι δυσκολίες που αντιμετωπίζονται κατά τη ζύγιση του μαγνητικού ιοντικού υγρού και για να καταστεί πιο ομοιόμορφη η διασπορά του, καθιστώντας την προτεινόμενη μέθοδο πιο επαναλήψιμη. Η μεταβολή του pH του δείγματος κατά το στάδιο της εκχύλισης επιτρέπει την εκχύλιση των SAs και των τριαζινών από το ίδιο δείγμα μέσα σε 15 λεπτά. Η νέα αυτή αναλυτική μέθοδος είναι ευαίσθητη (όρια ποσοτικοποίησης: 0,034-0,091 μg/L) και επαναλήψιμη (σχετική τυπική απόκλιση: 5,2-8,1%), ενώ επιτυγχάνει καλές ανακτήσεις (89-101%) για δείγματα νερού λίμνης και βιολογικού καθαρισμού. Τέλος, αναπτύχθηκε μια αναλυτική μέθοδος βασισμένη σε φερρίτες ψευδαργύρου σε μια διαδικασία μικροεκχύλισης διασποράς μαγνητικής στερεάς φάσης, υποβοηθούμενη από υπερήχους. Παρόλο που είναι γνωστό ότι ο ψευδάργυρος εμφανίζει μεγάλη συγγένεια για τα SAs, δεν υπάρχουν μέθοδοι προκατεργασίας δείγματος που να βασίζονται σε αυτήν την ιδιότητα. Η σύνθεση των φερριτών του ψευδαργύρου γίνεται απευθείας και το προκύπτον υλικό εμφανίζει αξιόλογες μαγνητικές ιδιότητες, οι οποίες επιτρέπουν τη συλλογή τους μετά την εκχύλιση. Οι φερρίτες ψευδαργύρου μπορούν να εκχυλίσουν αποδοτικά και εκλεκτικά τα SAs από δείγματα νερού λίμνης και αυγών. Η νέα διαδικασία επιτυγχάνει χαμηλά όρια ποσοτικοποίησης (0,06 μέχρι 0,11 μg/L), αποδεκτές ανακτήσεις (88-101%), ικανοποιητικούς συντελεστές προσυγκέντρωσης (111-141), ενώ επηρεάζεται ελάχιστα από το υπόστρωμα (από -8% έως 8%). Επιπλέον, η μέθοδος έχει μεγάλη γραμμική περιοχή (μέχρι τα 250 μg/L) γεγονός που επιτρέπει τον προσδιορισμό των SAs σε μεγαλύτερες και μικρότερες συγκεντρώσεις από το ανώτατο επιτρεπτό όριο. Λόγω των προαναφερθέντων πλεονεκτημάτων, της απλότητας, ευκολίας σύνθεσης του προσροφητικού και την αποδοτικότητα της όλης διαδικασίας, η μέθοδος που αναπτύχθηκε μπορεί να χρησιμοποιηθεί σε αναλύσεις ρουτίνας για τα σουλφοναμίδια.

Part VII Steps Following the Adoption of a Commission Decision, 17 Publication of Antitrust Decisions and Other Documents

This chapter describes the legal basis for and the scope of the publication of Commission antitrust decisions as well as the procedure for preparing a public version of a decision. Publishing the Commission’s antitrust decisions is particularly important. In addition to informing the public of the Commission’s work, it has the specific purpose of deterring antitrust violations by exposing the wrongdoing of the infringers to the public, informing economic operators of what type of behaviour may be considered violation of antitrust rules and enabling victims of antitrust infringements to seek compensation for the damages suffered. Regulation 1/2003 lists the antitrust decisions the main content of which the Commission is obliged to publish. Beyond this, however, and within the limits of the duty of professional secrecy, the Commission enjoys broad discretion to make available to the public as much information as possible. The preparation of a public version of a decision, similarly to preparing access to the file and to granting access to documents pursuant to Regulation 1049/2001, requires determination of what information is confidential.