Получение трансгенных линий мышей для изучения возможности конверсии лактозы в галактоолигосахариды в молочной железе

Современные методы трансгенеза позволяют проводить сложные модификации геномов животных для различ- ных задач. В биотехнологии создают трансгенных животных с модификациями молока, в том числе с улучшенными антибактериальными свойствами, измененным липидным составом или новыми вкусовыми качествами. Одним из перспективных направлений в этой области можно назвать оверэкспрессию β-галактозидаз – ферментов, разлагающих лактозу, – для удаления лактозы из молока сельскохозяйственных животных. В нашей работе мы исследуем подход с экспрессией трансгалактазилирующего фермента молочнокислой бактерии Lactobacillus delbrueckii. В теории синтез этого фермента в молочной железе мыши должен приводить к исчезновению в молоке лактозы благодаря ее конверсии в галактоолигосахариды. Мы создали две трансгенные линии животных для тестирования этой гипотезы. На первом этапе протестировали различные варианты генетических конструкций, включая сигналы локализации в аппарат Гольджи, и выбрали два варианта гена β-галактозидазы под конститутивным и казеиновым промоторами для получения трансгенных линий мышей методом пронуклеарной микроинъекции. Для каждой из конструкций было получено по четыре трансгенных фаундера. Мы провели предварительный анализ характеристик трансгенных линий (копийность трансгена, экспрессия, наследование трансгена) и собрали молоко от лактирующих самок для дальнейших исследований.

Клонирование и экспрессия гена целлюлазы Penicillium sp. ‘occitanis’ в Komagataella phaffii T07, выделение и анализ свойств

Проведены клонирование и анализ свойств целлюлазы Penicillium sp. ‘occitanis’. Ген был обнаружен в геномных данных базы NCBI. Получена плазмида pPZL-4xBGLU-Pocc, несущая четыре копии конструкции, экспрессирующей ген целлюлазы P. sp. ‘occitanis’. Плазмида была клонирована в штамм дрожжей Komagataella phaffii T07 под контроль промотора и терминатора гена AOX1. Было клонировано четыре копии экспрессирующей конструкции. В результате получен штамм K. phaffii T07 BGLU-4xPocc. Максимальный уровень экспрессии этого штамма составил ~4 000 000 Ед/л культуральной жидкости при культивировании в 5-литровом биореакторе. Полученный белок, согласно данным гельэлектрофореза, дает полосу ~39.5 кДа, что соответствует расчетной массе, и обширную область примерно от 42 до 70 кДa. Формирование этой области говорит о возможном гликозилировании белка при экспрессии в K. phaffii. Анализ свойств фермента показал, что температурный оптимум активности составляет 55–65 °С, рН оптимум – примерно 1.5–2. Фермент сохраняет 50 % активности при pH от 1.5 до 6 и от 30 до 80 °С. Он стабилен при температуре ниже 75 °С в течение 4 ч, но при 85 °С за 4 ч теряет 50 % активности. Фермент устойчив при рН от 4 до 7.5.

Глиадины: структура и токсичные эпитопы

В обзоре показаны особенности структуры глиадинов, а также распределение эпитопов, связанных с целиакией, среди глиадинов разных типов. Рассмотрено несколько приоритетных подходов, позволяющих ускорить создание сортов пшеницы с улучшенным составом глютена (клейковины), безопасного для здоровья.

Анализ экспрессии гена Q, контролирующего ряд важных признаков пшениц, включенных в процесс доместикации и селекции

Анализ экспрессии гена Q, контролирующего основные признаки, по которым человек вел отбор у пшениц (род Triticum L.) в процессе доместикации и селекции, показал, что формирование морфологии колоса возделываемых видов пшениц действительно зависит от уровня экспрессии этого гена. На основании результатов работы установлено, что кроме нарушения в позиции 329 Q белка на его функцию и морфологию колоса пшениц также оказывают влияние другие факторы и гены.