De-Novo Cloning of FKBP23 cDNA from Pig ER Using Nested PCR

2009 ◽  
Vol 64 (3-4) ◽  
pp. 297-302
Author(s):  
Ruifang Han ◽  
Ying Wang ◽  
Chen Chen ◽  
Zhuo Zhao ◽  
Huaifeng Mi
Keyword(s):  
Molecular Chaperone ◽  
Nested Pcr ◽  
De Novo ◽  
Predicted Amino Acid Sequence ◽  
High Identity ◽  
Ppiase Domain ◽  
Ef Hand ◽  
Main Protein ◽  
Fk506 Binding Proteins ◽  
Chaperone Hsp70

FK506 binding proteins (FKBPs) in cells are known as immunophilins. We have identifi ed and characterized a cDNA encoding an endoplasmic reticulum (ER) immunophilin, FKBP23, from pig liver by nested PCR. The predicted amino acid sequence of pig FKBP23 shows high identity to those of human FKBP23 and mouse FKBP23. It possesses a conserved FKBP-type peptidylprolyl cis-trans isomerase (PPIase) domain and EF-hand domain. We constructed a plasmid to express pFKBP23. Furthermore, we proved that the recombinant pFKBP23 can specifi cally bind to natural BiP, the main protein of the molecular chaperone Hsp70 in ER lumen; the binding is interrelated with the Ca2+ concentration just as the FKBP23 from mice.

Binding of FKBP23 to BiP in ER Shown by Gel Filtration Chromatography

2007 ◽  
Vol 62 (1-2) ◽  
pp. 133-137 ◽  
Author(s):  
Chen Chen ◽  
Hui Ma ◽  
Huaifeng Mi ◽  
Ying Wang
Keyword(s):  
Endoplasmic Reticulum ◽  
Molecular Chaperone ◽  
Binding Sites ◽  
Gel Filtration ◽  
Gel Filtration Chromatography ◽  
Terminal Domain ◽  
Ppiase Domain ◽  
Main Protein ◽  
Chaperone Hsp70

FKBP23 was found in mouse endoplasmic reticulum (ER) in 1998. It consists of an N-terminal peptidyl-prolyl cis/trans isomerase (PPIase) domain and a C-terminal domain with Ca2+ binding sites. Previously, we reported that FKBP23 specifically binds to BiP, the main protein of the molecular chaperone Hsp70 in ER lumen, and the binding is interrelated with the Ca2+ concentration. In this work we have found the existence of the complex FKBP23/BiP by separation of an ER extract using gel filtration chromatography (GFC), and that the existence of this complex is Ca2+-interrelated. This result further verified the Ca2+- interrelated binding of these two proteins in vivo.

scholarly journals Synthesis and Turnover of Embryonic Sea Urchin Ciliary Proteins during Selective Inhibition of Tubulin Synthesis and Assembly

1997 ◽  
Vol 8 (11) ◽  
pp. 2187-2198 ◽  
Author(s):  
Raymond E. Stephens
Keyword(s):  
Steady State ◽  
Sea Urchin ◽  
Molecular Chaperone ◽  
De Novo ◽  
Selective Inhibition ◽  
Strongylocentrotus Droebachiensis ◽  
Protein Labeling ◽  
Architectural Proteins ◽  
Ciliary Protein ◽  
Chaperone Hsp70

When ciliogenesis first occurs in sea urchin embryos, the major building block proteins, tubulin and dynein, exist in substantial pools, but most 9+2 architectural proteins must be synthesized de novo. Pulse-chase labeling with [3H]leucine demonstrates that these proteins are coordinately up-regulated in response to deciliation so that regeneration ensues and the tubulin and dynein pools are replenished. Protein labeling and incorporation into already-assembled cilia is high, indicating constitutive ciliary gene expression and steady-state turnover. To determine whether either the synthesis of tubulin or the size of its available pool is coupled to the synthesis or turnover of the other 9+2 proteins in some feedback manner, fully-ciliated mid- or late-gastrula stage Strongylocentrotus droebachiensis embryos were pulse labeled in the presence of colchicine or taxol at concentrations that block ciliary growth. As a consequence of tubulin autoregulation mediated by increased free tubulin, no labeling of ciliary tubulin occurred in colchicine-treated embryos. However, most other proteins were labeled and incorporated into steady-state cilia at near-control levels in the presence of colchicine or taxol. With taxol, tubulin was labeled as well. An axoneme-associated 78 kDa cognate of the molecular chaperone HSP70 correlated with length during regeneration; neither colchicine nor taxol influenced the association of this protein in steady-state cilia. These data indicate that 1) ciliary protein synthesis and turnover is independent of tubulin synthesis or tubulin pool size; 2) steady-state incorporation of labeled proteins cannot be due to formation or elongation of cilia; 3) substantial tubulin exchange takes place in fully-motile cilia; and 4) chaperone presence and association in steady-state cilia is independent of background ciliogenesis, tubulin synthesis, and tubulin assembly state.

HSP70 and lysosomal storage disorders: novel therapeutic opportunities

2010 ◽  
Vol 38 (6) ◽  
pp. 1479-1483 ◽  
Author(s):  
Nikolaj H.T. Petersen ◽  
Thomas Kirkegaard
Keyword(s):  
Heat Shock ◽  
Stress Responses ◽  
Molecular Chaperone ◽  
Heat Shock Protein 70 ◽  
Physiological Stress ◽  
Lysosomal Storage ◽  
Catabolic Enzymes ◽  
Chaperone Hsp70 ◽  
Storage Disorders ◽  
Novel Therapeutic

Lysosomes, with their arsenal of catabolic enzymes and crucial metabolic housekeeping functions are experiencing a revived research interest after having lived a rather quiet life for the last few decades. With the discovery of the interaction of the lysosomes with another ancient component of cellular homoeostasis, the molecular chaperone HSP70 (heat-shock protein 70), the stage seems set for further discoveries of the mechanisms regulating cellular and physiological stress responses to otherwise detrimental challenges.

scholarly journals The molecular chaperone Hsp70 promotes the proteolytic removal of oxidatively damaged proteins by the proteasome

2016 ◽  
Vol 99 ◽  
pp. 153-166 ◽  
Author(s):  
Sandra Reeg ◽  
Tobias Jung ◽  
José P. Castro ◽  
Kelvin J.A. Davies ◽  
Andrea Henze ◽  
...  
Keyword(s):  
Molecular Chaperone ◽  
Chaperone Hsp70

Suppression of polyglutamine-mediated neurodegeneration in Drosophila by the molecular chaperone HSP70

10.1038/70532 ◽  
1999 ◽  
Vol 23 (4) ◽  
pp. 425-428 ◽  
Author(s):  
John M. Warrick ◽  
H.Y. Edwin Chan ◽  
Gladys L. Gray-Board ◽  
Yaohui Chai ◽  
Henry L. Paulson ◽  
...  
Keyword(s):  
Molecular Chaperone ◽  
Chaperone Hsp70

Molecular cloning and characterization of an endo-β-mannanase gene expressed in the lettuce endosperm following radicle emergence

2004 ◽  
Vol 14 (3) ◽  
pp. 267-276 ◽  
Author(s):  
Aoxue Wang ◽  
Jieran Li ◽  
J. Derek Bewley
Keyword(s):  
Blot Analysis ◽  
Cdna Sequence ◽  
Tomato Fruit ◽  
Predicted Amino Acid Sequence ◽  
Degenerate Primers ◽  
High Identity ◽  
Lettuce Seeds ◽  
Radicle Emergence ◽  
Rapid Amplification

Endo-β-mannanase (EC 3.2.1.78), an enzyme that mobilizes the endosperm cell walls of the lettuce (Lactuca sativa L.) seed, increases in activity in the micropylar and lateral regions of this tissue following the completion of germination. Its complementary DNA (cDNA) sequence (LsMan1) was determined using the polymerase chain reaction (PCR) with degenerate primers. The 3‘-end of the cDNA sequence was obtained by 3‘-end rapid amplification of cDNA ends (RACE), and the 5‘-end sequence by genome walking and 5‘-end RACE. The predicted amino acid sequence from the cDNA has a high identity with endo-β-mannanases present in other species (e.g. 67% identity with coffee β-1,4-mannan endohydrolase, 62% identity with tomato fruit endo-β-mannanase). Southern blot analysis suggests the presence of several members of an endo-β-mannanase gene family in the lettuce genome. Several isoforms of the enzyme, including three major ones, were detected by isoelectric focusing. Based on Northern blot analysis, accumulation of the endo-β-mannanase mRNA occurred only after lettuce seeds had germinated, and increased thereafter, although enzyme activity persisted after transcription declined.

scholarly journals Μοριακή ανάλυση των μεταλλάξεων του PIG-A γονιδίου στις νόσους ανεπαρκείας του μυελού των οστών

2013 ◽  
Author(s):  
Άννα Ευθυμίου
Keyword(s):  
Nested Pcr ◽  
De Novo

Τα επίκτητα σύνδρομα ανεπαρκείας του μυελού των οστών αποτελούν, η επίκτητη απλαστική αναιμία (ΑΑ), η παροξυσμική νυχτερινή αιμοσφαιρινουρία (ΠΝΑ), τα μυελοδυσπλαστικά σύνδρομα (ΜΔΣ), χαρακτηρίζονται από απλαστικό ή υποπλαστικό μυελό των οστών και φαίνεται ότι μοιράζονται κοινούς παθοφυσιολογικούς μηχανισμούς, αυξημένη γενωμική αστάθεια και αυξημένη συχνότητα εξέλιξης σε οξεία μυελογενή λευχαιμία (ΟΜΛ).Μελετήσαμε τη συχνότητα μιας συγκεκριμένης έλλειψης 5 βάσεων του γονιδίου PIG-A -5bp deletion GTACT- και τις μεταλλάξεις FLT3-ITD και NPM1σε δείγματα αίματος και μυελού των οστών στους ακόλουθους ασθενείς:1 με ΑΑ, 1 με ΑΑ/ΠΝΑ, 17 με ΠΝΑ, 85 με ΜΔΣ, 24 με ΟΜΛ, 16 με χρονία μυελογενή λευχαιμία (ΧΜΛ) και σε 48 υγιείς μάρτυρες. Υπήρχε διαθέσιμοDNA σε 14 ασθενείς τόσο κατά τη διάγνωση του ΜΔΣ όσο και κατά την εξέλιξη σε ΟΜΛ. Η έλλειψη των 5 βάσεων του γονιδίου PIG-A ανιχνεύθηκε μετά την πρώτη PCR μόνο σε 3 ασθενείς με ΠΝΑ. Με την semi-nested PCR η έλλειψη των 5 βάσεων του γονιδίου PIG-A ανιχνεύθηκε στον ασθενή με την ΑΑ/ΠΝΑ, σε 4/17 ασθενείς με ΠΝΑ, σε 9/48 υγιείς μάρτυρες (18.75%) και σε 14/85 ασθενείς με ΜΔΣ (16.5%). Από τα 14 διπλά δείγματα ΜΔΣ/ΟΜΛ, μόνο ένα ήταν θετικό κατά τη διάγνωση του ΜΔΣ, όμως η μετάλλαξη δεν ανιχνεύθηκε κατά την εξέλιξη σε ΟΜΛ. Αντίθετα, ένα δείγμα το οποίο ήταν αρνητικό στη διάγνωση του ΜΔΣ, ανευρέθη θετικό κατά την εξέλιξη σε ΟΜΛ. Θετικά δείγματα για τη μετάλλαξη FLT3-ITD ανιχνεύθησαν σε 8/85 ασθενείς με ΜΔΣ (9.41%) και σε 10/24 ασθενείς με ΟΜΛ (41.67%), ενώ δεν ανιχνεύθησαν μεταξύ των ασθενών με ΑΑ, ΑΑ/ΠΝΑ, ΠΝΑ και ΧΜΛ. Από τα3/14 διπλά δείγματα ΜΔΣ/ΟΜΛ, ήταν θετικά για τη μετάλλαξη FLT3-ITD κατά τη διάγνωση του ΜΔΣ, ενώ η μετάλλαξη συνέχισε να ανιχνεύεται και μετά την εξέλιξη σε ΟΜΛ. Ένα αρνητικό δείγμα για τη μετάλλαξη FLT3-ITD κατά τη διάγνωση του ΜΔΣ, θετικοποιήθηκε κατά την εξέλιξη σε ΟΜΛ. Μεταλλάξεις της NPM1 ανιχνεύθησαν μόνο σε δύο ασθενείς με de novo ΟΜΛ ταυτόχρονα με τη μετάλλαξη FLT3-ITD και σε έναν ασθενή με ΧΜΛ σε πλήρη μοριακή ύφεση υπό αγωγή με imatinib. Τέλος, προσπαθήσαμε να εξηγήσουμε το γενετικό εκείνο γεγονός που μεταλλάσει τα αιμοποιητικά κύτταρα και προκαλεί μια κλωνική διαταραχή σε διαφορετικούς ασθενείς με ΜΔΣ κατά την εξέλιξή τους σε ΟΜΛ, χρησιμοποιώντας τον συγκριτικό χρωμοσωμικό υβριδισμό (chCGH).Παρατηρήθηκε ένα κοινό πρότυπο ενίσχυσης συγκεκριμένων χρωμοσωμικών θέσεων σε διαφορετικούς ασθενείς με ΜΔΣ κατά την εκτροπή τους σε ΟΜΛ. Περαιτέρω μελέτες θα πρέπει να γίνουν για να αποδειχθεί αν η περίσσεια γενωμικού υλικού οδηγεί σε αυξημένη μεταγραφή/μετάφραση και ως εκ τούτου συμμετέχει στη λευχαιμογένεση. Κυρίως όμως η μελέτη αυτή καταδεικνύει ότι, τα κύτταρα του κλώνου της ΠΝΑ αν και ανευρίσκονται στα σύνδρομα ανεπαρκείας του μυελού των οστών, δεν είναι αυτά που επιλέγονται για την κλωνική εξέλιξη κατά την εκτροπή σε ΟΜΛ

scholarly journals The molecular chaperone Hsp70 from the thermotolerant Diptera species differs from the Drosophila paralog in its thermostability and higher refolding capacity at extreme temperatures

2019 ◽  
Vol 24 (6) ◽  
pp. 1163-1173
Author(s):  
David G. Garbuz ◽  
Dmitry Sverchinsky ◽  
Artem Davletshin ◽  
Boris A. Margulis ◽  
Vladimir Mitkevich ◽  
...  
Keyword(s):  
Molecular Chaperone ◽  
Extreme Temperatures ◽  
Chaperone Hsp70
Sign in / Sign up

Export Citation Format

Share Document