Fluorescence Measurement of Mitochondrial Membrane Potential Changes in Cultured Cells

2018 ◽  
pp. 121-135 ◽  
Author(s):  
David G. Nicholls
Keyword(s):  
Membrane Potential ◽  
Mitochondrial Membrane Potential ◽  
Mitochondrial Membrane ◽  
Cultured Cells ◽  
Fluorescence Measurement

scholarly journals Fluorescence measurement of absolute mitochondrial membrane potential in adherent cultured cells

2010 ◽  
Vol 1797 ◽  
pp. 125
Author(s):  
Akos A. Gerencser ◽  
Christos Chinopoulos ◽  
Matthew J. Birket ◽  
Martin Jastroch ◽  
David G. Nicholls ◽  
...  
Keyword(s):  
Membrane Potential ◽  
Mitochondrial Membrane Potential ◽  
Mitochondrial Membrane ◽  
Cultured Cells ◽  
Fluorescence Measurement

scholarly journals A digitized-fluorescence-imaging study of mitochondrial Ca2+ increase by doxorubicin in cardiac myocytes

1992 ◽  
Vol 281 (3) ◽  
pp. 871-878 ◽  
Author(s):  
E Chacon ◽  
R Ulrich ◽  
D Acosta
Keyword(s):  
Membrane Potential ◽  
Energy Conservation ◽  
Fluorescence Imaging ◽  
Cardiac Myocytes ◽  
Mitochondrial Membrane Potential ◽  
Mitochondrial Membrane ◽  
Cell Injury ◽  
Cultured Cells ◽  
Imaging Study

The objective of the present study was to investigate the role of mitochondrial Ca2+ in doxorubicin-induced cell injury. The effect of doxorubicin on cultured cells was investigated by digitized fluorescence imaging. The Ca2+ sensitive fluorescent dye fura-2 was used to estimate cytosolic, mitochondrial and total cellular Ca2+. Rhodamine 123 was used to estimate the mitochondrial membrane potential, and cellular ATP was determined by h.p.l.c. The data showed that doxorubicin induced greater-than-2-fold increases in mitochondrial Ca2+ before changes in cytosolic Ca2+ could be detected. An increase in mitochondrial Ca2+ paralleled the observed dissipation in mitochondrial membrane potential. Cellular ATP levels appeared to decrease as a result of mitochondrial dysfunction, which in turn produced greater-than-2-fold increases in cytosolic Ca2+. The data suggest that doxorubicin-induced alterations in mitochondrial Ca2+ homoeostasis are associated with a dissipation in energy conservation, which may result in cell injury.

scholarly journals Quantitative measurement of mitochondrial membrane potential in cultured cells: calcium-induced de- and hyperpolarization of neuronal mitochondria

2012 ◽  
Vol 590 (12) ◽  
pp. 2845-2871 ◽  
Author(s):  
Akos A. Gerencser ◽  
Christos Chinopoulos ◽  
Matthew J. Birket ◽  
Martin Jastroch ◽  
Cathy Vitelli ◽  
...  
Keyword(s):  
Membrane Potential ◽  
Mitochondrial Membrane Potential ◽  
Mitochondrial Membrane ◽  
Quantitative Measurement ◽  
Cultured Cells

scholarly journals Assessment of fish freshness based on fluorescence measurement of mitochondrial membrane potential

Food Control ◽  
2020 ◽  
Vol 115 ◽  
pp. 107301
Author(s):  
Jérôme Cléach ◽  
Méline Soret ◽  
Thierry Grard ◽  
Philippe Lencel
Keyword(s):  
Membrane Potential ◽  
Mitochondrial Membrane Potential ◽  
Mitochondrial Membrane ◽  
Fluorescence Measurement

Tetramethyl Rhodamine Methyl Ester (TMRM) is Suitable for Cytofluorometric Measurements of Mitochondrial Membrane Potential in Cells Treated with Digitonin

1999 ◽  
Vol 19 (1) ◽  
pp. 27-34 ◽  
Author(s):  
Daniel Floryk ◽  
Josef Houštêk
Keyword(s):  
Membrane Potential ◽  
Mitochondrial Membrane Potential ◽  
Mitochondrial Membrane ◽  
Cultured Cells ◽  
Antimycin A ◽  
Optimal Conditions ◽  
Cell Systems ◽  
Different Types ◽  
Model Cell ◽  
The Stability

A new method for cytofluorometric analysis of mitochondrial membrane potential ΔΨ has been developed by using TMRM as a cationic, mitochondrial selective probe. The method is based on limited treatment of cultured cells with digitonin which permeabilises the plasma membrane and leaves mitochondria intact. The resulting signal of TMRM-stained cells thus represents only the probe accumulated in mitochondria. Fibroblasts and cybrids were used as a model cell systems and optimal conditions for digitonin treatment and staining by TMRM were described. The TMRM signal collapsed by valinomycin, KCN and antimycin A and FCCP titration was used to gradually lower ΔΨ and characterise the stability of ΔΨ. The method is suitable for sensitive measurement of ΔΨ in different types of cultured cells.

Platelets apoptosis in rats after global brain ischemia

2018 ◽  
pp. 27-35
Author(s):  
А.А. Соколовская ◽  
Э.Д. Вирюс ◽  
В.В. Александрин ◽  
А.С. Роткина ◽  
К.А. Никифорова ◽  
...  
Keyword(s):  
Flow Cytometry ◽  
Ischemic Stroke ◽  
Membrane Potential ◽  
Mitochondrial Membrane Potential ◽  
Brain Ischemia ◽  
Mitochondrial Membrane ◽  
Male Rats ◽  
Global Brain Ischemia ◽  
Platelet Apoptosis ◽  
Global Brain

Цель исследования. Ишемические повреждения головного мозга, являются одной из наиболее частой причин инвалидности и смертности во всем мире. Недавно была установлена роль апоптоза тромбоцитов в патофизиологии инсульта, однако его механизмы до сих пор остаются невыясненными. Несмотря на различные экспериментальные модели, направленные на мониторинг апоптоза тромбоцитов, результаты, относительно изучения и выявления апоптоза тромбоцитов при ишемии головного мозга у крыс, весьма немногочисленны. Цель исследования - анализ апоптоза тромбоцитов с помощью метода проточной цитофлуориметрии на модели глобальной ишемии мозга у крыс. Методика. В экспериментах использовано 6 крыс-самцов Вистар в возрасте от 5 до 6 мес., разделенных на 2 группы: интактный контроль (К) и глобальная ишемия головного мозга. Модель глобальной ишемии головного мозга у крыс воспроизводилась путём билатеральной окклюзии общих сонных артерий на фоне гипотензии. Уровень системного артериального давления снижали посредством кровопотери до 40-45 мм рт. ст. Суспензию тромбоцитов крыс получали методом гельфильтрации с использованием сефарозы 2B. Для анализа экстернализации фосфатидилсерина (ФС) тромбоциты крыс инкубировали с Аннексином V-PE в связывающем буфере. Для оценки митохондриального мембранного потенциала (ММП) тромбоциты инкубировали с катионным красителем JC-1. После инкубации образцы немедленно анализировали на проточном цитофлуориметре FACSCalibur (Becton Dickinson, США). Результаты. Согласно полученным данным, экстернализация ФС на тромбоцитах крыс, перенесших инсульт, была значительно выше (53,45 ± 4,21%), чем в контрольной группе крыс (5,27 ± 2,40%). Данный эффект подтверждается выраженной деполяризацией митохондриальных мембран (DYm). После экспериментальной ишемии мозга почти 40% тромбоцитов было деполяризовано. Заключение. Использованный в работе подбор методов и маркеров обеспечивает понимание механизмов апоптоза тромбоцитов как в экспериментальных, так и в клинических условиях. Полученные данные позволяют сделать заключение, что апоптоз тромбоцитов является одним из факторов развития глобальной ишемии головного мозга у крыс. Результаты могут быть использованы для понимания механизмов, участвующих в развитии ишемического повреждения, что, в свою очередь, может быть использовано при разработке новых терапевтических стратегий. Aim. Stroke is one of the most common causes of disability and mortality worldwide. Multiple experimental models of stroke have focused on monitoring of platelet apoptosis. However, studies on and detection of platelet apoptosis in rats with ischemic stroke are very scarce. We investigated platelet apoptosis in rats with global brain ischemia using flow cytometry. Methods. Experiments were carried out on healthy, adult Wistar male rats weighing 300-350 g. The rats were divided into the following 2 groups: intact rats and rats with global brain ischemia. Global brain ischemia was induced by two-vessel (2-VO) carotid occlusion in combination with hypotension. Systemic blood pressure was reduced by 40-45 mm Hg by inducing haemorrhage. Platelets were isolated by gel filtration on Sepharose 2B. For evaluation of phosphatidylserine (PS) externalization, platelets were incubated with Annexin V-PE and analyzed on FACSCalibur (BD Biosciences). Mitochondrial membrane potential (DY) was measured during platelets apoptosis using JC-1, a mitochondrial membrane potential indicator. Platelets were analyzed by flow cytometry immediately after the incubation. Results. PS externalization on platelets was significantly greater after global brain ischemia (53.45 ± 4.21%) than in the control group (5.27 ± 2.40%). Pronounced depolarization of mitochondrial membrane potential (DYm) confirmed this finding. In the rat group with experimental brain ischemia, almost 40% (35.24 ± 5.21%) of platelets were depolarized. Conclusion. Our results provide insight into mechanisms involved in platelet apoptosis during ischemic stroke and can be used in further development of new therapeutic strategies.

Sign in / Sign up

Export Citation Format

Share Document