Isolation and Characterization of Cancer Stem Cells In Vitro

Author(s):  
Craig Gedye ◽  
Laurie Ailles
2019 ◽  
Author(s):  
Ιωάννης Βερίγος

Τα καρκινικά βλαστικά κύτταρα (ΚΒΚ) αποτελούν έναν υποπληθυσμό των καρκινικών κυττάρων με ιδιότητες αυτο-ανανέωσης και διαφοροποίησης, που θεωρείται ότι ευθύνονται για την ανάπτυξη του όγκου και την υποτροπή μετά από θεραπεία. Η ικανότητα των ΚΒΚ να επιβιώνουν μετά από εφαρμογή συμβατικών μορφών αντικαρκινικής θεραπείας συνέβαλε στην προσπάθεια ανάπτυξης νέων θεραπευτικών στρατηγικών που στοχεύουν τα συγκεκριμένα κύτταρα. Πρόσφατες μελέτες, υποδεικνύουν ότι οι μοναδικές ιδιότητες των ΚΒΚ φαίνεται να υπόκεινται σε επιγενετική ρύθμιση. Η LSD1 / KDM1A, μία απομεθυλάση ιστονών, ρυθμίζει τις βλαστικές ιδιότητες των κυττάρων, ενώ επίσης υπερεκφράζεται σε διαφορετικούς τύπους καρκίνου συμπεριλαμβανομένου και του καρκίνου του μαστού. Στην παρούσα εργασία, στόχος μας ήταν να διερευνήσουμε τον ρόλο της LSD1 στην χημειο-ανθεκτικότητα των ΚΒΚ του μαστού. Πειράματα ανοσοϊστοχημείας σε δείγματα ασθενών με καρκίνο του μαστού επιβεβαίωσαν τη σύνδεση της έκφρασης της LSD1 με λιγότερο διαφοροποιημένους όγκους του μαστού. Επιπλέον, ο γονιδιακός χειρισμός της έκφρασης της LSD1 με διαφορετικές πειραματικές προσεγγίσεις, συσχέτισε την απομεθυλάση με την χημειο-ανθεκτικότητα των καρκινικών κυττάρων του μαστού. Επιπροσθέτως, έχοντας εγκαθιδρύσει και χαρακτηρίσει εκτενώς ένα in vitro σύστημα καλλιέργειας σφαιρικών δομών εμπλουτισμένο σε καρκινικά βλαστικά κύτταρα του μαστού, πειράματα γονιδιακής αποσιώπησης και υπερέκφρασης, έδειξαν ότι το ένζυμο ρυθμίζει τις βλαστικές ιδιότητες του υπο-πληθυσμού των καρκινικών βλαστικών κυττάρων του μαστού CD44+/CD24-/low.. Επιπλέον, η φαρμακολογική αναστολή της LSD1 οδήγησε σε μείωση των ΚΒΚ και εξασθένιση του δυναμικού βλαστικότητας in vitro, ενώ ήταν σε θέση να οδηγήσει σε συρρίκνωση των όγκων και να μειώσει τον υποπληθυσμό ΚΒΚ in vivo. Εν κατακλείδι, η ανθεκτικότητα στη χημειοθεραπεία των καρκινικών βλαστικών κυττάρων του μαστού επιβεβαιώθηκε στο σύστημά μας μέσω των αντίστοιχων πειραματικών προσεγγίσεων. Ωστόσο, η χορήγηση ενός αναστολέα της LSD1 κατέστησε τα καρκινικά βλαστικά κύτταρα του μαστού πιο ευαίσθητα στις ευρέως χρησιμοποιούμενες θεραπευτικές μεθόδους, όπως δείχνουν οι ποσοτικοί προσδιορισμοί του ρυθμού πολλαπλασιασμού των κυττάρων και σχηματισμού σφαιρικών δομών. Πειράματα με ξενομοσχεύματα σε επίμυες βρίσκονται σε εξέλιξη για να επιβεβαιωθεί ότι η στόχευση της LSD1 σε συνδυασμό με χημειοθεραπευτικούς παράγοντες αναστέλλει αποτελεσματικότερα την ανάπτυξη όγκων. Τα παραπάνω δεδομένα υποδηλώνουν έντονα ότι η LSD1 αποτελεί έναν πιθανό θεραπευτικό στόχο στα καρκινικά βλαστικά κύτταρα του μαστού, καθώς βρέθηκε ότι ρυθμίζει τις βλαστικές ιδιότητες των κυττάρων αυτών και έτσι προσδίδει χημειο-ανθεκτικές ικανότητες.


1996 ◽  
Vol 91 (2) ◽  
pp. 141-146 ◽  
Author(s):  
P. H. Jones

1. The keratinocytes in human epidermis are constantly turned over and replaced by a population of stem cells located in the basal epidermal layer. Until recently there were no markers allowing the isolation of viable epidermal stem cells. However, it has now been shown that epidermal stem cells can be isolated both in vitro and direct from the epidermis as they express high levels of functional β1 integrin family receptors for extracellular matrix proteins. 2. The evidence for integrins as stem cell markers and the insights that have been gained into stem cell behaviour are reviewed.


Author(s):  
Ravi Thakur ◽  
Niti Kumari ◽  
Durga Prasad Mishra

2016 ◽  
Vol 2016 ◽  
pp. 1-18 ◽  
Author(s):  
Subhash C. Juneja ◽  
Sowmya Viswanathan ◽  
Milan Ganguly ◽  
Christian Veillette

The procedure for aspiration of bone marrow from the femur of patients undergoing total knee arthroplasty (TKA) or total hip arthroplasty (THA) may vary from an OR (operating room) to OR based on the surgeon’s skill and may lead to varied extent of clotting of the marrow and this, in turn, presents difficulty in the isolation of mesenchymal stem cells (MSCs) from such clotted bone marrow. We present a simple detailed protocol for aspirating bone marrow from such patients, isolation, and characterization of MSCs from the aspirated bone marrow specimens and show that the bone marrow presented no clotting or exhibited minimal clotting. This represents an economical source and convenient source of MSCs from bone marrow for use in regenerative medicine. Also, we presented the detailed protocol and showed that the MSCs derived from such bone marrow specimens exhibited MSCs characteristics and generated micromass cartilages, the recipe for regenerative medicine for osteoarthritis. The protocols we presented can be used as standard operating procedures (SOPs) by researchers and clinicians.


2012 ◽  
Vol 64 (4) ◽  
pp. 477-484 ◽  
Author(s):  
Song-Ling Zhang ◽  
Yi-Shu Wang ◽  
Tong Zhou ◽  
Xiao-Wei Yu ◽  
Zhen-Tong Wei ◽  
...  

Sign in / Sign up

Export Citation Format

Share Document