Development of a Cell-recycled Continuous Fermentation Process for Enhanced Production of Succinic Acid by High-yielding Mutants of Actinobacillus succinogenes

Author(s):  
Soo Yeon Kim ◽  
Sun Ok Park ◽  
Jeong Yeon Yeon ◽  
Gie-Taek Chun
2018 ◽  
Author(s):  
Δημήτριος Λαδάκης

Στόχος της παρούσας διατριβής υπήρξε η αξιολόγηση του παράπλευρου ρεύματος που παράγεται από βιομηχανίες χαρτοπολτού (SSL), ως κύρια πρώτη ύλη για την παραγωγή ηλεκτρικού οξέος, μέσω μικροβιακών ζυμώσεων σε συνθήκες συνεχούς καλλιέργειας σε βιοαντιδραστήρα. Στα πλαίσια της επίτευξης οικονομικότερων διεργασιών, εκπονήθηκε τεχνοοικονομική ανάλυση των διεργασιών παραγωγής ηλεκτρικού οξέος, με χρήση του SSL ως πρώτη ύλη, σε συνεχείς και ημισυνεχείς ζυμώσεις. Απώτερος στόχος του εγχειρήματος αυτού ήταν η διερεύνηση της οικονομικής βιωσιμότητας της παραγωγής ηλεκτρικού οξέος αξιοποιώντας το SSL ως πρώτη ύλη, καθώς και η εύρεση στοιχείων που υποδεικνύουν τους οικονομικούς παράγοντες που σχετίζονται με την παραγωγή του προϊόντος. Το SSL αποτελεί το κύριο παράπλευρο ρεύμα που προκύπτει μετά την όξινη διαδικασία που πραγματοποιείται για την παραγωγή χαρτοπολτού κυρίως σε σκληρά ξύλα. Το υποπροϊόν αυτό περιέχει διαλύτη λιγνίνη υπό την μορφή λιγνοσουλφονικών αλάτων καθώς και σάκχαρα τα οποία προκύπτουν κατά την αποικοδόμηση της ημικυτταρίνης. Το είδος του χρησιμοποιούμενου ξύλου και οι συνθήκες επεξεργασίας αποτελούν τα δύο κύρια σημεία που καθορίζουν το είδος και την περιεκτικότητα των σακχάρων που περιέχονται στο SSL. Στη μελέτη αυτή, χρησιμοποιήθηκε το υποπροϊόν που προέκυψε από τη βιομηχανία επεξεργασίας του φυτού Eucalyptus globulus.Σαν πρώτο στάδιο της μελέτης, αξιολογήθηκε η ικανότητα χρήσης του SSL ως υπόστρωμα σε συνεχείς ζυμώσεις, χρησιμοποιώντας τα βακτηριακά στελέχη Actinobacillus succinogenes και Basfia succiniciproducens. Τα στελέχη αυτά θεωρούνται ως τα δύο πιο υποσχόμενα στελέχη για βιομηχανική εφαρμογή. Αρχικά, οι ζυμώσεις διεξήχθησαν με σταθερό ρυθμό αραίωσης ίσο με 0,04 h-1 και διαφορετικές αρχικές συγκεντρώσεις εμπορικής ξυλόζης (23-55 g/L) ή σταθερή συγκέντρωση ξυλόζης (40 g/L) και διαφορετικές τιμές ρυθμών αραίωσης (0,02-0,25 h-1). Τα αποτελέσματα αυτών των συνθηκών έδειξαν ότι και τα δύο στελέχη παρείχαν ικανοποιητική παραγωγή ηλεκτρικού οξέος σε ένα εύρος ρυθμών αραίωσης μεταξύ 0,02-0,15 h-1. Στις συνεχείς καλλιέργειες με χρήση SSL το οποίο είχε προεπεξεργαστεί με νανοδιήθηση, επετεύχθησαν μέγιστες αποδόσεις ηλεκτρικού οξέος σε ρυθμό αραίωσης 0,02 h-1. Συγκεκριμένα το στέλεχος A. succinogenes είχε απόδοση 0,48 g/g και το στέλεχος B. Succiniciproducens 0,55 g/g. Ωστόσο, η μέγιστη παραγωγικότητα του A. Succinogenes (0,67 g/L/h) παρουσιάστηκε με ρυθμό αραίωσης 0,04 h-1 ενώ στην περίπτωση του B. succiniciproducens η μέγιστη παραγωγικότητα ίση με 1,6 g/L/h επιτεύχθηκε σε ρυθμό αραίωσης 0,1 h-1. Κατά την πραγματοποίηση των ζυμώσεων και στα δύο στελέχη, παρατηρήθηκε η δημιουργία φυσικής ακινητοποίησης του μικροοργανισμού στα μέρη του βιοαντιδραστήρα. Εξαιτίας αυτού, η συγκέντρωση της βιομάζας καθίστανται αδύνατο να μετρηθεί επομένως οι συγκεντρώσεις της βιομάζας σε διαφορετικούς ρυθμούς αραίωσης και για τα δύο στελέχη προσδιορίστηκε με χρήση ανάλυσης μεταβολικής ροής. Για την τεχνοοικονομική ανάλυση του ηλεκτρικού οξέος, ο σχεδιασμός όλης της διεργασίας βασίστηκε στα πειραματικά αποτελέσματα ενώ τα ισοζύγια μάζας και ενέργειας πραγματοποιήθηκαν λύνοντας εξισώσεις που διέπουν οι νόμοι της θερμοδυναμικής και επαληθεύτηκαν μέσω του λογισμικού UniSim. Οι ζυμώσεις για την παραγωγή του ηλεκτρικού οξέος στα αποτελέσματα των οποίων βασίστηκαν οι υπολογισμοί, διενεργήθηκαν με τον μικροοργανισμό Basfia succiniciproducens. Ο πειραματικός σχεδιασμός για την παραλαβή του προϊόντος βασίστηκε στη διαδικασία της απευθείας κρυστάλλωσης του ηλεκτρικού οξέος όπου χρησιμοποιήθηκαν ρητίνες ιοντοανταλλαγής ως μέσω για την μετατροπή των οργανικών αλάτων σε οργανικά οξέα. Οι κρύσταλλοι ηλεκτρικού οξέος που προκύπτουν μέσω αυτής της διαδικασίας έχουν καθαρότητα ίση με 99% ενώ η ανάκτηση του προϊόντος τέθηκε ως 97%. Ο μεγάλος συντελεστής ανάκτησης του προϊόντος οφείλεται στην περαιτέρω επεξεργασία των παράπλευρων ρευμάτων που προκύπτουν από την συνολική διεργασία διαχωρισμού. Κατά την τεχνοοικονομική ανάλυση έγινε προσομοίωση της παραγωγής ηλεκτρικού οξέος για συνεχείς και ημισυνεχείς ζυμώσεις σε τρεις διαφορετικές δυναμικότητες παραγωγής (5, 30 και 100 kt) ηλεκτρικού οξέος ανά έτος. Σκοπός της μελέτης ήταν να αξιολογήσει την οικονομική βιωσιμότητα της βιοχημικής παραγωγής ηλεκτρικού οξέος με χρήση SSL ως πηγής άνθρακα. Από την μελέτη προέκυψε ως ελάχιστη τιμή πώλησης (MSP) ηλεκτρικού οξέος τα 2,70 $/kg στις συνεχείς ζυμώσεις και 3,06 $/kg στις ημισυνεχείς με τη χρήση εμπορικών πηγών αζώτου. Περεταίρω μελέτη για την μείωση των ελάχιστων τιμών πώλησης έδειξε ότι η χρήση πηγών αζώτου προερχόμενων από υδρολύματα θα μείωνε το κόστος πώλησης στα 2,16 $/kg και 2,76 $/kg, στις συνεχείς και ημισυνεχείς ζυμώσεις αντίστοιχα. Τα στάδια της ζύμωσης καθώς και η εξάτμιση αποδείχθηκαν σημαντικοί οικονομικοί παράγοντες όσον αφορά το λειτουργικό κόστος και το κόστος του κεφαλαίου. Επομένως, η βελτιστοποίηση των γεωμετρικών χαρακτηριστικών του βιοαντιδραστήρα καθώς και εναλλακτικές πιο οικονομικά προσιτές τεχνικές εξάτμισης, θα πρέπει να εξεταστούν σε μελλοντική έρευνα.


KSBB Journal ◽  
2014 ◽  
Vol 29 (3) ◽  
pp. 155-164 ◽  
Author(s):  
Sang-Min Park ◽  
Kyuri Eum ◽  
Sangyong Kim ◽  
Yong-Seob Jeong ◽  
Dohoon Lee ◽  
...  

2020 ◽  
Vol 26 (4) ◽  
pp. 200121-0
Author(s):  
Suwimon Kanchanasuta ◽  
Verawat Champreda ◽  
Nipon Pisutpaisal ◽  
Chatchawal Singhakant

Bio-succinic acid is a commodity chemical with potent application in bioplastic and food industries which can be produced from renewable resources. In this study, bioprocess for production of bio-succinic from glycerol by Actinobacillus succinogenes was studied. The maximum succinic acid concentration in small-scale serum bottle experiments was 6.8 and 6.5 g/L using pure and crude glycerol, respectively, with supplemented MgCO3. The ratio of acetic acid to succinic acid (AA/SA) implied the increased carbon flux to the C4 pathway using crude glycerol supplemented with MgCO3 compared to that with CaCO3.The carbonate salts tended to induce C3 metabolic pathway in fermentation using pure glycerol which was in accordance with the ratio of acetic acid to glycerol (AA/GL). The highest succinic acid concentration of 17.9 g/L from crude glycerol was achieved from batch fermentation in a lab-scale fermenter with the maximum glycerol utilization of 99.9% which were higher than those obtained from fed- batch and semi-continuous processes. Acetic acid tended to increase throughout the fermentation process in fed-batch and semi-continuous operations, which resulted in the lower product yield and substrate utilization efficiency. The time for initial purging of CO2 showed effects on succinic acid production and internal metabolic pathways. This work provided a basis for process development on bio-succinic acid production from crude glycerol in industry.


2010 ◽  
Vol 45 (6) ◽  
pp. 980-985 ◽  
Author(s):  
Jian Li ◽  
Min Jiang ◽  
Kequan Chen ◽  
Longan Shang ◽  
Ping Wei ◽  
...  

2009 ◽  
Vol 100 (8) ◽  
pp. 2425-2429 ◽  
Author(s):  
Pu Zheng ◽  
Jin-Jun Dong ◽  
Zhi-Hao Sun ◽  
Ye Ni ◽  
Lin Fang

2005 ◽  
Vol 71 (12) ◽  
pp. 7880-7887 ◽  
Author(s):  
Sang Jun Lee ◽  
Dong-Yup Lee ◽  
Tae Yong Kim ◽  
Byung Hun Kim ◽  
Jinwon Lee ◽  
...  

ABSTRACT Comparative analysis of the genomes of mixed-acid-fermenting Escherichia coli and succinic acid-overproducing Mannheimia succiniciproducens was carried out to identify candidate genes to be manipulated for overproducing succinic acid in E. coli. This resulted in the identification of five genes or operons, including ptsG, pykF, sdhA, mqo, and aceBA, which may drive metabolic fluxes away from succinic acid formation in the central metabolic pathway of E. coli. However, combinatorial disruption of these rationally selected genes did not allow enhanced succinic acid production in E. coli. Therefore, in silico metabolic analysis based on linear programming was carried out to evaluate the correlation between the maximum biomass and succinic acid production for various combinatorial knockout strains. This in silico analysis predicted that disrupting the genes for three pyruvate forming enzymes, ptsG, pykF, and pykA, allows enhanced succinic acid production. Indeed, this triple mutation increased the succinic acid production by more than sevenfold and the ratio of succinic acid to fermentation products by ninefold. It could be concluded that reducing the metabolic flux to pyruvate is crucial to achieve efficient succinic acid production in E. coli. These results suggest that the comparative genome analysis combined with in silico metabolic analysis can be an efficient way of developing strategies for strain improvement.


Sign in / Sign up

Export Citation Format

Share Document