ΕισαγωγήΠαραδοσιακά τα μεσεγχυματικά βλαστικά κύτταρα (MSCs) μπορούν να προκύψουν από πληθώρα ανθρώπινων ιστών. Πρόσφατα, MSCs απομονώθηκαν από εξωεμβρυϊκές πηγές όπως το ομφαλικό αίμα και η γέλη του Wharton, οι αμνιακές μεμβράνες, το αμνιακό υγρό και ο πλακούντας. ΜSCs προερχόμενα από πλακουντιακές χοριακές λάχνες πρώτου τριμήνου φαίνεται να ομοιάζουν, βιολογικά, στα εμβρυϊκά βλαστικά κύτταρα (ESCs), λόγω του πρώιμου σταδίου ανάπτυξης του πλακούντα.Στην παρούσα μελέτη, προσπαθήσαμε να διαλευκάνουμε τα κοινά χαρακτηριστικά μεταξύ των MSCs προερχόμενα από πρώτου τριμήνου χοριακές λάχνες και ESC. Με βάση τα δεδομένα προηγούμενων μελετών, πραγματοποιήθηκαν παρατεταμένες χρονικά καλλιέργειες των MSCs με σκοπό να αξιολογηθούν in vitro, πως διαμορφώνονται το δυναμικό διαφοροποίησης, τα μοριακά χαρακτηριστικά και γενικότερα οι δείκτες πολυδυναμοκότητας καθόλη τη περίοδο καλλιέργειας.Υλικά και ΜέθοδοιMSCs ελήφθησαν από 30 δείγματα χοριακών λαχνών και καλλιεργήθηκαν για να εκτιμηθεί η ικανότητα πολλαπλασιασμού τους και τα μορφολογικά χαρακτηριστικά. Κυτταρομετρία ροής χρησιμοποιήθηκε για να προσδιοριστεί η έκφραση των αντιγόνων επιφανείας των MSCs. Τα MSCs διαφοροποιήθηκαν σε λιποκύτταρα, οστεοβλάστες, χονδροκύτταρα και νευρικά κύτταρα. Μέσω RT-PCR ανάλυθηκε η έκφραση των γονιδίων-δεικτών των ESC και των γονιδίων δεικτών της διαφοροποίησης.ΑποτελέσματαΤα χοριακά λαχνικά κύτταρα, αναπτύσσονται εύκολα, είναι φαινοτυπικά σταθερά με χαρακτηριστική ινοβλαστοειδή μορφολογία. MSCs ανακαλλιεργήθηκαν για 20 φορές κατά τη διάρκεια περιόδου 120 ημερών. Ρυθμός πολλαπλασιασμού των MSCs παρέμενε σταθερός στα πρώιμα στάδια (3η-12η ανακαλλιέργεια) και παρουσίασε πτώση στα μεταγενέστερα στάδια (13η-20η ανακαλλιέργεια). Καθόλη τη διάρκεια της παρατεταμένης χρονικά καλλιέργειας ο καρυότυπος των κυττάρων δεν τροποποιηθήκε.Η ανάλυση κυτταρομετρίας ροής έδειξε ότι τα κύτταρα χοριακών λαχνών ήταν θετικά για CD90, CD73, CD105, CD29, CD44, HLA ABC αντιγόνα και αρνητικά για CD14, CD34, AC133, και HLA DR αντιγόνα, για ολόκληρη την περίοδο καλλιέργειας.Τα από χοριακές λάχνες προερχόμενα MSCs διαφοροποιήθηκαν επιτυχώς σε λιποκύτταρα, οστεοβλάστες, χονδροκύτταρα αλλά και σε νευρικά κύτταρα. Διαφοροποίηση επιβεβαιώθηκε με χρώσεις Oil Red Ο, Alizarin Red S, Alcian Blue και Cresyl Violet αντίστοιχα και έκφραση των γονιδίων PPARγ2, SPP1, Sox9 και Νεστίνης αντίστοιχα.Η έκφραση ESCs γονιδίων-δεικτών POU5F1 (Οct-4) και Nanog παρατηρήθηκε σε πρώιμα στάδια (4-12 περάσματα), ενώ τα τελευταία στάδια (14-20 περάσματα) δεν παρουσίασαν ανιχνεύσιμα επίπεδα έκφρασης. ZFP42 και Sox2 έκφραση δεν παρατηρήθηκε. Επιπλέον, MSCs βρέθηκαν να εκφράζουν το γονίδιο GATA4 αλλά όχι το NES (νεστίνη) σε μη διαφοροποιημένα κύτταρα.ΣυμπεράσματαΤα από χοριακές λάχνες προερχόμενα MSCs έχουν πολυδύναμες ιδιότητες μεταξύ εμβρυϊκών και ενήλικων βλαστικών κύτταρα. Στην παρούσα μελέτη με τη χρήση ενός ευρύτερου φάσματος δεικτών, διαπιστώθηκε ότι MSC από χοριακές λάχνες εμφανίζουν υψηλό ρυθμό πολλαπλασιασμού, διατηρώντας αναλλοίωτο το χρωμοσωμικό τους προφίλ, και την αυτό-ανανεωτική ικανότητα τους, μοιράζονται κοινή έκφραση αντιγόνων επιφάνειας με τα ενήλικα MSCs και εκφράζουν ορισμένα γονίδια μάρτυρες των εμβρυϊκών βλαστικών κυττάρων. Αυτά τα χαρακτηριστικά θέτουν τις χοριακές λάχνες ως μια ελκυστική πηγή MSC για τις ανάγκες της αναγεννητικής ιατρικής.
Modified Alizarin Red S-Alcian Blue Staining for Reptilian Skeleton
