Introducción: La enterocolitis necrotizante (ECN) es la patología gastrointestinal de las más comunes y devastadoras en recién nacido con muy bajo peso al nacer (rango entre 500-1500g) y se caracteriza por inflamación y necrosis intestinal. Los objetivos de este estudio fueron desarrollar un modelo murino de ECN así como un modelo de sobreexpresión de proteínas en el intestino mediante la administración enteral mediante sonda de vectores lentivirales.
Métodos: Para el modelo de ECN se utilizaron cepas de ratón C57BL6 y CD1 a los cuales se les trató por 6 veces cada dos horas con una dosis de anoxia con CO2 al 100% durante 10 o 7.5 minutos seguida una reoxigenación mediante hiperoxia al 95% por 5 minutos. Además, para activar el sistema inmune se administró LPS en las primeras dos dosis. Para la sobreexpresión de prolactina (PRL) en el intestino se administraron vectores lentivirales que sobreexpresan GFP (como control) o PRL por vía enteral a ratones CD1 en edades postnatales P2 y P3. Posteriormente se analizó la presencia de GFP y prolactina de las muestras de intestino mediante visualización por microscopia de fluorescencia y Western blot, respectivamente.
Resultados: Se obtuvo una mortalidad del 45% y una eficiencia de desarrollo de ECN entre los animales vivos del 100% en ratones CD1 de edad postnatal P1, en contraste con la mortalidad de 85% y la eficiencia de desarrollo de ECN entre los animales vivos del 0% en ratones C57Bl6 de P1. En relación al modelo de sobreexpresión de proteínas en el intestino, se detectó GFP en el intestino de ratones administrados con 106 TU/ml vectores lentivirales para la sobreexpresión de GFP en el día P2 y evaluados 24 horas después. No se observó la sobreexpresión de PRL en el intestino de ratones administrados con 106 y 108 TU/ml vectores lentivirales para la sobreexpresión de PRL en los días P2 y P3 y evaluados 48 horas después.
Conclusión: El modelo de ECN en ratones CD1 de P1 tuvo una efectividad del 100% a pesar de una mortalidad elevada. Además, se logró estandarizar el método para la sobreexpresión de proteínas en el intestino de ratones en P2 24 horas después de la administración de vectores lentivirales por la via enteral. La determinación de sobreexpresión de PRL en el intestino no fue conclusiva.
Background: Necrotizating enterocolitis (NEC) is one of the most common and devastating gastrointestinal disease in newborns with very low weight birth (range among 500 -1500 g). NEC is characterized by intestinal inflammation and necrosis. Our aims of this study were to develop a NEC murine model and a intestinal protein expression model by means of enteral administration of lentiviral vectors.
Method: For the NEC model were used C57BL6 and CD1 mice which were treated with anoxia with 100% CO2 for 10 or 7.5 minutes followed by 95% O2 for 5 minutes. This treatment was repeated six times with a 2 hours interval. Moreover, to activate the immune system, LPS was administrated orally in the first two doses. For the overexpression of prolactin (PRL) in the intestine, lentiviral vectors that overexpress GFP (as a control) or PRL were administered by orally to CD1 mice at postnatal ages P2 and P3. Then, the presence of GFP and prolactin in the intestine samples was analyzed by fluorescence microscopy and Western blot, respectively.
Result: Mortality of 45% and a NEC development efficiency of 100% was obtained among live animals in CD1 mice of P1 postnatal age, in contrast to the mortality of 85% and development efficiency of 0% among live animals in C57BL6 mice of P1 age. In relation to the protein overexpression model in the intestine, GFP was detected in the mice gut administrated with 106 lentiviral vectors for the GFP overexpression on P2 evaluated 24 hours later. PRL overexpression was not observed in mice that received on day P1 postnatal 106 and 108 TU/ml of lentiviral vectors for the overexpression of PRL and evaluated on days P2 and P3.
Conclusion: NEC model had an effectiveness of 100% in CD1 mice of 1 day of life, despite the high mortality. Moreover, a method for protein overexpression in the intestine was standardized. Lenviral vectors were orally administered 24 hours after birth and the expression of the protein was detected 24 hours later. Prolactin overexpression determination was not conclusive.
Métodos inmunológicos para la detección de cambios en el sistema dopaminérgico: western blot y neurohistología para la detección de DARPP-32
