Capturing Enveloped Viruses on Affinity Grids for Downstream Cryo-Electron Microscopy Applications

Electron microscopy (EM), cryo-electron microscopy (cryo-EM), and cryo-electron tomography (cryo-ET) are essential techniques used for characterizing basic virus morphology and determining the three-dimensional structure of viruses. Enveloped viruses, which contain an outer lipoprotein coat, constitute the largest group of pathogenic viruses to humans. The purification of enveloped viruses from cell culture presents certain challenges. Specifically, the inclusion of host-membrane-derived vesicles, the complete destruction of the viruses, and the disruption of the internal architecture of individual virus particles. Here, we present a strategy for capturing enveloped viruses on affinity grids (AG) for use in both conventional EM and cryo-EM/ET applications. We examined the utility of AG for the selective capture of human immunodeficiency virus virus-like particles, influenza A, and measles virus. We applied nickel-nitrilotriacetic acid lipid layers in combination with molecular adaptors to selectively adhere the viruses to the AG surface. This further development of the AG method may prove essential for the gentle and selective purification of enveloped viruses directly onto EM grids for ultrastructural analyses.

DC-SIGN Interactions with Human Immunodeficiency Virus: Virus Binding and Transfer Are Dissociable Functions

ABSTRACT The C-type lectins DC-SIGN and DC-SIGNR capture and transfer human immunodeficiency virus (HIV) to susceptible cells, although the underlying mechanism is unclear. Here we show that DC-SIGN/DC-SIGNR-mediated HIV transmission involves dissociable binding and transfer steps, indicating that efficient virus transmission is not simply due to tethering of virus to the cell surface.

Infecção pelo HIV entre usuários de drogas injetáveis: análise dos fatores de risco no Município do Rio de Janeiro, Brasil

O trabalho visa a determinar os fatores de risco para a infecção pelo HIV (Human Immunodeficiency Virus - vírus da aids) entre usuários de drogas injetáveis (UDI), no Município do Rio de Janeiro. Os entrevistados foram recrutados em centros de tratamento para usuários de drogas e nas "cenas de uso" ("ruas"). Foram utilizados três questionários: um destinado a colher informações mais gerais acerca dos UDI, adaptado de estudo anterior da Organização Mundial da Saúde (OMS); um segundo voltado para a pesquisa de informações suplementares sobre conhecimentos, comportamentos e atitudes em relação à aids; além de um terceiro instrumento destinado a avaliar níveis de disfunção psicológica. O estudo consistiu de 110 entrevistados que voluntariamente realizaram testes laboratoriais para a presença do HIV, além de outros agentes infecciosos de transmissão sangüínea (HBV, HCV, HDV, HGV/GBV-C, HTLV-I/II). A soroprevalência para o HIV-1 foi de 28,7%. Utilizando-se um modelo de regressão logística múltipla (Estatística de Hosmer-Lemeshow, c² = 1,89; p=0,98), foram identificados como fatores de risco para a infecção pelo HIV: "local de moradia de baixa renda" (OR=5,57; IC 95%: [1,39 - 22,27]), "fonte de renda irregular" (OR=3,26; IC 95%: [1,01 - 10,51]), "menor idade de início quando do consumo de drogas injetáveis" (OR=2,50; IC: 90%: [0,99 - 6,28]), "local de recrutamento nos centros de tratamento para uso de drogas" (vs. recrutamento nas "ruas") (OR=7,91; IC 95%: [2,03 - 30,87]) e "maior freqüência de compartilhamento do material de injeção nos 6 meses anteriores à entrevista" (OR=4,41; IC 95%: [1,33 - 14,64]).