Eliane Cristina Moreno de Pedri
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Catiane Dos Santos Braga
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Carlos Alberto Da Cunha Oliveira
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Auana Vicente Tiago
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Ana Aparecida Bandini Rossi
O estabelecimento de protocolo de extração de DNA de espécies vegetais é uma técnica empregada para a obtenção de um DNA puro e de qualidade. Diante disso, objetivou-se neste estudo padronizar um protocolo para a extração de DNA da espécie Acianthera ciliata, visando posteriores estudos de diversidade genética. Foram testados dois métodos de trituração do tecido foliar, sendo eles: Tampão STE e nitrogênio líquido. Para cada método de trituração foram testadas duas concentrações de β-mercaptoetanol (0% e 2%). Os dois métodos utilizados, foram eficientes na extração do DNA genômico de A. ciliata. As amostras extraídas com 0% de β-mercaptoetanol, para os dois métodos, STE e nitrogênio líquido, apresentaram menor quantidade de DNA quando comparado com as amostras extraídas com 2% de β-mercaptoetanol. Os dois primers testados amplificaram regiões do genoma de A. ciliata. Para a extração de DNA de A. ciliata indica-se a utilização de CTAB 5% no tampão de extração e β-mercaptoetanol a 2%. Os iniciadores ISSR foram eficientes na amplificação e são recomendados para estudos de diversidade genética de A. ciliata.Palavras-chave: diversidade genética; CTAB; marcadores moleculares; orquídeas. EVALUATION OF TWO MACERATION METHODS IN Acianthera ciliata (Orchidaceae) LEAVES FOR DNA EXTRACTION ABSTRACT: The establishment of DNA extraction protocol for plant species is a technique employed to obtain pure and good quality DNA. In this study, we standardized a protocol for the extraction of DNA of the species Acianthera ciliata, aiming studies of genetic diversity subsequently. Two maceration methods for foliar tissue were tested, and they were STE buffer and liquid nitrogen. Two concentrations of β-mercaptoethanol (0% and 2%) were tested for each method. The two methods used were efficient for genomic DNA extraction of A. ciliata. In both methods the samples extracted using 0% of β-mercaptoethanol, they presented lesser amount of DNA than the samples extracted using 2% of β-mercaptoethanol. The two tested primers amplified genomic regions of A. ciliata. For the DNA extraction of A. ciliata, we indicated the use of CTAB 5% in the extraction buffer as well as β-mercaptoethanol to 2%. The ISSR primers were efficient in amplification and thus they are indicated for studies of genetic diversity of A. ciliata.Keywords: genetic diversity; CTAB; molecular markers; orchids.
Protocol for DNA extraction from any plant species (alkaline PVPP method)
