scholarly journals Desenvolvimento e padronização do Dot-ELISA usando peptídeos recombinantes para o diagnóstico sorológico de Neospora caninum

2014 ◽  
Vol 34 (8) ◽  
pp. 723-727
Author(s):  
Rafael D. Blanco ◽  
Cintia F. Fidelis ◽  
Leandro S. Araujo ◽  
Adriana M. Henao ◽  
Jose A. Cardona ◽  
...  
Keyword(s):  
Pichia Pastoris ◽  
Neospora Caninum ◽  
E 92 ◽  
Dot Elisa

A neosporose é reconhecida como uma das maiores causas de aborto e perdas neonatais em bovinos de leite e corte em todo o mundo. Nos últimos anos esta doença tem atraído o interesse de pesquisadores com foco na epidemiologia e métodos eficazes de diagnóstico desta doença. No presente estudo objetivou-se desenvolver e padronizar um teste Dot-ELISA para o diagnóstico sorológico de Neospora caninum com um peptídeo recombinate como antígeno, visando o desenvolvimento de um kit para diagnóstico a campo. O peptídeo recombinante (rNcGRA1) foi desenhado com base na metodologia de genética reversa de epítopos antigênicos originados de uma proteína de grânulos densos de N. caninum, e sintetizado pela GenScript (USA). Produzido mediante o processo fermentativo em leveduras Pichia pastoris KM71. Para a padronização do Dot-ELISA, membranas de nitrocelulose de 0.22µm foram sensibilizadas com 1µL do antígeno e posteriormente os soros foram diluídos em solução de lavagem e incubados durante 1 hora. A revelação foi feita mediante a adição de Proteína G marcada com peroxidase por 30 minutos, seguido da solução reveladora a base de 3,3’-Diaminobenzidine (DAB). Logo após a padronização foram testados 44 soros bovinos diagnosticados por imunofluorescência indireta (RIFI), obtendo-se uma concordância nos resultados do teste de 95,5% e uma sensibilidade e especificidade de 100% e 92% respectivamente. Quanto ao Kit para diagnóstico a campo na Plataforma Tecnológica RapidFlow-Through Miriad®, o peptídeo rNcGRA1 apresentou marcações visíveis ao reagir com os soros positivos, e não apresentou marcações usando os soros negativos. Este estudo é o primeiro a utilizar peptídeos recombinantes e mostrar-se eficiente para o diagnóstico sorológico de bovinos naturalmente infetados por N. caninum.

Serologic immunoreactivity to Neospora caninum antigens in dogs determined by indirect immunofluorescence, western blotting and dot-ELISA

2005 ◽  
Vol 130 (1-2) ◽  
pp. 73-79 ◽  
Author(s):  
A.M. Pinheiro ◽  
M.F. Costa ◽  
B. Paule ◽  
V. Vale ◽  
M. Ribeiro ◽  
...  
Keyword(s):  
Western Blotting ◽  
Indirect Immunofluorescence ◽  
Neospora Caninum ◽  
Dot Elisa

scholarly journals Ocorrência de anticorpos anti-Neospora spp. em jumentos (Equus asinus) no estado de Sucre - Colômbia

2014 ◽  
Vol 66 (2) ◽  
pp. 450-454 ◽  
Author(s):  
R.D. Blanco ◽  
J.H. Patarroyo ◽  
M.I. Vargas ◽  
J.A. Cardona ◽  
L.S. Araújo ◽  
...  
Keyword(s):  
Neospora Caninum ◽  
Equus Asinus ◽  
Dot Elisa

A neosporose tem grande importância em bovinos, e sua patogênese neste hospedeiro, em termos gerais, está esclarecida, porém, em equídeos é pobremente conhecida. Na Colômbia ainda não foram reportados anticorpos Anti-Neospora spp. em equídeos, sendo assim objetivou-se no presente estudo avaliar a ocorrência do parasito em jumentos (Equus asinus) de fazendas que apresentavam risco da doença nestes animais. Foram utilizados 56 animais no estado de Sucre (Colômbia), escolhidos aleatoriamente dentro das fazendas selecionadas. Utilizou-se um peptídeo recombinante originado de Neospora caninum (NcGRA1) para o diagnóstico por Dot-ELISA, e o soro foi diluído em 1:200. Este estudo reporta, pela primeira vez no estado de Sucre e na Colômbia, a presença de anticorpos anti-Neospora spp. na espécie Equus asinus, com uma ocorrência de 19,7% (11/56) dos animais amostrados.

scholarly journals Frecuencia de anticuerpos anti-Neospora caninum en ovinos del departamento de Córdoba, Colombia

2013 ◽  
pp. 3886-3890 ◽  
Author(s):  
Joaquin Patarroyo S ◽  
Marlene Vargas V ◽  
José Cardona Á ◽  
Rafael Blanco M ◽  
Victor Gomez L
Keyword(s):  
Neospora Caninum ◽  
Dot Elisa

RESUMENObjetivo. Evaluar la frecuencia de anticuerpos anti-N. caninum en dos rebaños de ovinos del departamento de Córdoba-Colombia. Materiales y métodos. El estudio fue realizado en el departamento de Córdoba (Colombia) en dos explotaciones de ovinos que presentaron antecedentes de abortos y muerte de animales adultos. Se muestrearon 28 hembras adultas de pelo criollo (Camura), escogidas por muestreo aleatorio simple. Un péptido recombinante de Neospora caninum (NcGRA1) fue utilizado para el diagnóstico por DOT-ELISA y el suero fue diluido en 1:200. Resultados. Este estudio reporta por primera vez para el departamento y para el país la presencia de anticuerpos anti-N. caninum en el 78.6% (22/28) de los ovinos muestreados. Conclusiones. Estos resultados confirman la infección por Neospora caninum en ovinos y la necesidad de nuevos estudios que asocien la presencia del parasito con manifestaciones clínicas en diferentes regiones del país.

scholarly journals Use of ELISA based on NcSRS2 of Neospora caninumexpressed in Pichia pastoris for diagnosing neosporosis in sheep and dogs

2015 ◽  
Vol 24 (2) ◽  
pp. 148-154 ◽  
Author(s):  
Amanda Fernandes Pinheiro ◽  
Sibele Borsuk ◽  
Maria Elisabeth Aires Berne ◽  
Luciano da Silva Pinto ◽  
Renato Andreotti ◽  
...  
Keyword(s):  
Pichia Pastoris ◽  
Recombinant Protein ◽  
Indirect Fluorescent Antibody Test ◽  
Neospora Caninum ◽  
Fluorescent Antibody ◽  
Antibody Test ◽  
Elisa Test ◽  
Economic Losses ◽  
Important Species ◽  
Immunoenzymatic Assay

Neosporosis is a disease caused by the protozoon Neospora caninum that leads to significant economic losses in many countries. In the present study, we report on use of the recombinant protein NcSRS2 of N. caninum expressed in Pichia pastoris in an indirect immunoenzymatic assay (ELISA) for diagnosing neosporosis infection in sheep and dogs. We observed that the ELISA test yielded specificity of 94.5% and sensitivity of 100% for sheep and specificity of 93.3% and sensitivity of 100% for dogs. We observed that the sensitivity was higher than shown by the indirect fluorescent antibody test, and this was confirmed by means of Western blot. The results from this study suggest that the recombinant protein expressed in P. pastoris is a suitable antigen for use in immunodiagnosis to detect N. caninum in two important species exposed to this parasitosis.

Comparative Study of Widal and Dot Elisa in the Diagnosis of Typhoid Fever

2012 ◽  
Vol 3 (4) ◽  
pp. 303-304
Author(s):  
Cinthujah B Cinthujah B ◽  
◽  
Amudha VP Amudha VP ◽  
Sucilathangam G Sucilathangam G
Keyword(s):  
Comparative Study ◽  
Typhoid Fever ◽  
Dot Elisa

Optimization of fermentation conditions for the production of recombinant hpdgf-bb in Pichia pastoris

2015 ◽  
Vol 37 (1se) ◽  
Author(s):  
Duong Long Duy ◽  
Pham Minh Vu ◽  
Nguyen Tri Nhan ◽  
Tran Linh Thuoc ◽  
Dang Thi Phuong Thao
Keyword(s):  
Pichia Pastoris ◽  
Fermentation Conditions ◽  
Optimization Of Fermentation

Cloning and Expression of Recombinant Human Insulin Gene in Pichia pastoris

2019 ◽  
Vol 10 (01) ◽  
Author(s):  
Rafid A. Abdulkareem
Keyword(s):  
Pichia Pastoris ◽  
Human Insulin ◽  
Expression Vector ◽  
Expression System ◽  
Insulin Gene ◽  
Cloning And Expression ◽  
Pcr Analysis ◽  
Major Band ◽  
Human Insulin Gene ◽  
Pichia Pastoris Expression System

The main goal of the current study was cloning and expression of the human insulin gene in Pichia pastoris expression system, using genetic engineering techniques and its treatment application. Total RNA was purified from fresh normal human pancreatic tissue. RNA of good quality was chosen to obtain a first single strand cDNA. Human preproinsulin gene was amplified from cDNA strand, by using two sets of specific primers contain EcoR1 and Notl restriction sites. The amplified preproinsulin gene fragment was double digested with EcoRI and Not 1 restriction enzymes, then inserted into pPIC9K expression vector. The new pPIC9K-hpi constructive expression vector was transformed by the heat-shock method into the E.coli DH5α competent cells. pPic9k –hpi, which was propagated in the positive transformant E. coli cells, was isolated from cells and then linearised by restriction enzyme SalI, then transformed into Pichia pastoris GS115 using electroporation method. Genomic DNA of His+ transformants cell was extracted and used as a template for PCR analysis. The results showed, that the pPic9k – hpi was successfully integrated into the P. pastoris genome, for selected His+ transformants clones on the anticipated band at 330 bp, which is corresponded to the theoretical molecular size of the human insulin gene. To follow the insulin expression in transformans, Tricine–SDS gel electrophoresis and Western blot analysis were conducted. The results showed a successful expression of recombinant protein was detected by the presence of a single major band with about (5.8 KDa) on the gel. These bands correspond well with the size of human insulin with the theoretical molecular weight (5.8 KDa).

SOROPREVALÊNCIA E FATORES DE RISCO PARA A INFECÇÃO POR Neospora caninum EM CÃES DE ZONA RURAL DO MUNICÍPIO DE SOUSA, PARAÍBA

2020 ◽  
Vol 4 (3) ◽  
pp. 42
Author(s):  
Samara Dos Santos Silva ◽  
Leonardo Vinícius Silva de Oliveira ◽  
Radabley Rith Almeida Oliveira ◽  
Emerson T De Alcântara Timóteo ◽  
Pollyanne Raysa Fernandes de Oliveira ◽  
...  
Keyword(s):  
Odds Ratio ◽  
Neospora Caninum ◽  
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<p><span style="font-size: medium;"><em>Neospora caninum </em>é um protozoário cujos hospedeiros definitivos são canídeos domésticos e silvestres, e hospedeiros intermediários são os herbívoros. Objetivou-se determinar a prevalência de anticorpos IgG anti-<em>N. caninum </em>em cães de zona rural do município de Sousa, Paraíba. Foram analisadas amostras de 98 cães de zona rural, através da Reação de Imuno fluorescência Indireta no ponto de corte 1:50. A frequência de soro positividade foi de 9,18% (9/98). A titulação de anticorpos variou de 50 a 200, predominando o título 1:50. Em 66,6% (4/6) das propriedades avaliadas havia pelo menos um cão soropositivo. O contato com bovinos foi considerado fator de risco (<em>Odds ratio</em>=15,25) para a infecção, demonstrando maior risco de contato com tecidos contaminados. Conclui-se que os cães de zona rural do município de Sousa estão expostos ao <em>N. caninum</em>. </span></p>

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