scholarly journals LINC01213 promotes prostate cancer cell progression through miR-597/ BCL2L1 axis

2021 ◽  
Author(s):  
Xian Zhao ◽  
Xiaojing Xu ◽  
Qiong Wang ◽  
Xiaofei Wu
Keyword(s):  
Prostate Cancer ◽  
Reporter Gene ◽  
Reporter Gene Assay ◽  
Luciferase Reporter ◽  
Luciferase Reporter Gene ◽  
Western Blot Assay ◽  
Luciferase Reporter Gene Assay ◽  
Gene Assay

Abstract Background: Majority of cancer related deaths in males are attributed to prostate cancer (PRAD) throughout the world. Recently, the role of long non-coding RNAs (lncRNAs) in the pathogenesis of cancer has been widely explored. In this study, we investigated the role of lncRNA LINC01213 (LINC01213) in tumorigenesis of prostate cancer (PRAD).Methods: PRAD and adjacent tissue samples were collected from cancer patients. Survival rate among these patients was compared by Kaplan–Meier analysis. PRAD cells viability was estimated by CCK-8 method while AnnexinV/PI cytometry assay was used to determine the percent of apoptotic cells. qRT-PCR and western blot assay were used to determine the mRNA and protein expressions, respectively. Interaction between LINC01213 and corresponding miRNA as well as between miRNA and mRNA was confirmed by dual luciferase reporter gene assay. PRAD cells were also injected subcutaneously in nude mice to support in vitro findings.Results: It was observed that LINC01213 was highly expressed in PRAD samples and cell lines. Down-regulation of LINC01213 in PRAD cells decreased cell viability and inhibited proliferation. Luciferase reporter gene assay and RNA pull-down confirmed that LINC01213 targeted miR-597-3p. Increased expression of miR-597-3p resulted in decreased BCL2L2 expression in vitro. Inhibitory effects of miR-597-3p on PRAD cells’ survival and growth were diminished after LINC01213 overexpression which was also associated with alteration in the protein expression of BCL-xL, BCL-2 as well as caspase 3 and caspase 9.Conclusion: Taken together, our findings suggest that LINC01213 plays its role in PRAD tumorigenesis through miR-597-3p/ BCL2L2 dependent pathway with associated modulation of genes involved in cell survival and apoptosis.

Μελέτη της επίδρασης της ελευρωπαΐνης στην ομοιοστασία των λιπιδίων

2017 ◽  
Author(s):  
Φωτεινή Μάλλιου
Keyword(s):  
Reporter Gene ◽  
In Silico ◽  
Reporter Gene Assay ◽  
Luciferase Reporter ◽  
Wild Type ◽  
Luciferase Reporter Gene ◽  
Luciferase Reporter Gene Assay ◽  
Gene Assay

Η Ελευρωπαΐνη, το κύριο πολυφαινολικό συστατικό της ελιάς, παρουσιάζει αντιοξειδωτικές και υπολιπιδαιμικές ιδιότητες. Ο ενεργοποιημένος υποδοχέας επαγωγής του πολλαπλασιασμού των υπεροξεισωμάτων τύπου α (PPARα), διαδραματίζει καίριο ρόλο στον έλεγχο του μεταβολισμού των λιπιδίων και στην ενεργειακή ομοιαστασία του κυττάρου. Η συγκεκριμένη έρευνα εστιάζει στους μηχανισμούς της υπολιπιδαιμικής δράσης της Ελευρωπαΐνης με έμφαση στο ρόλο της Ελευρωπαΐνης στην ενεργοποίηση του PPARα. Για τον σκοπό αυτό, έγινε αξιολόγηση in silico της ικανότητας της Ελευρωπαΐνης να προσδένεται στον PPARα. Θεωρητικά μοντέλα πρόσδεσης στην κρυσταλλική δομή του PPARα με τη χρήση Μοριακής Προσομοίωσης Πρόσδεσης, επιβεβαιώνουν την υπόθεσή μας ότι η Ελευρωπαΐνη είναι αγωνιστής του PPARα. Επιπλέον, διερευνήθηκε in vitro με το Luciferase reporter gene assay η ικανότητα της Ελευρωπαΐνης να προσδένεται στον υποδοχέα PPARα και να τον ενεργοποιεί. Τα αποτελέσματα από την in silico και την in vitro μελέτη δείχνουν σαφώς ότι η ελευρωπαΐνη ενεργοποιεί τον PPARα. Στη συνέχεια έγινε in vivo διερεύνηση της ενεργοποίησης του PPARα από την Ελευρωπαΐνη και αξιολόγηση της επίδρασής της στο λιπιδαιμικό προφίλ των πειραματόζωων. Αγωγή αρσενικών μυών άγριου τύπου (SV129 Wild Type) με Ελευρωπαΐνη σε δοσολογία 100mg/kg, p.o, τα οποία ακολούθησαν τυπική δίαιτα για τρωκτικά, για 6 εβδομάδες, είχε ως αποτέλεσμα επαγωγή του Pparα και των γονιδίων-στόχων του στο ήπαρ, πιθανώς μέσω ενεργοποίησης του PI3K/AKT/p70S6K σηματοδοτικού μονοπατιού. Αυτή η επίδραση της Ελευρωπαΐνης φαίνεται να σχετίζεται άμεσα με σημαντική μείωση των επιπέδων των TGs του ορού και της ολικής χοληστερόλης, γιατί η Ελευρωπαΐνη δεν είχε καμία επίδραση σε αυτούς τους λιπιδαιμικούς δείκτες σε διαγονιδιακούς Pparα null μύες. Στην κατεύθυνση της διερεύνησης της επίδρασης της Ελευρωπαΐνης σε ηπατικούς παράγοντες και σε παράγοντες, που εκφράζονται στο λευκό λιπώδη, κρίσιμους για την ομοιοστασία των Τριγλυκεριδίων, διαπιστώθηκαν τα ακόλουθα: 1) Ενεργοποίηση της ορμονο-ευαίσθητης λιπάσης (HSL) στο λευκό λιπώδη ιστό (W.A.T.) των άγριου τύπου μυών, 2) επαγωγή ποικίλλων ηπατικών παραγόντων, που συμμετέχουν στη σύνθεση, τη μεταφορά, τον μεταβολισμό και την απέκκριση των τριγλυκεριδίων. Αυτή η ενεργοποίηση της HSL στον W.A.T. και των ηπατικών παραγόντων, που συμμετέχουν στην ομοιοστασία των λιπιδίων, είναι πιθανόν να ενισχύει την επαγόμενη από την Ελευρωπαΐνη μείωση των επιπέδων των τριγλυκεριδίων και της χοληστερόλης στον ορό. Συνοψίζοντας, φαίνεται ότι η Ελευρωπαΐνη μειώνει τα τριγλυκερίδια και την ολική χοληστερόλη του ορού σε μύες μέσω ενεργοποίησης του PPARα. Τα δεδομένα αυτής της μελέτης δείχνουν επίσης, ότι στην υπολιπιδαιμική δράση της Ελευρωπαΐνης συμμετέχει και η ενεργοποίηση της HSL στο λευκό λιπώδη ιστό καθώς και η επαγωγή ηπατικών γονιδίων, που διαδραματίζουν βασικό ρόλο την ομοιοστασία των τριγλυκεριδίων, δηλαδή τη σύνθεση, την μεταφορά, τον μεταβολισμό και την κάθαρσή τους. Συμπερασματικά, η μελέτη έδειξε τις υπολιπιδαιμικές δυνατότητες της Ελευρωπαΐνης σε μύες και αποσαφήνισε σε σημαντικό βαθμό τους μηχανισμούς της υπολιπιδαιμικής δράσης της, φωτίζοντας κυρίως τον ρόλο του PPARα. Επειδή η διατήρηση της ομοιοστασίας των λιπιδίων είναι μια πολύπλοκη διαδικασία, που ρυθμίζεται από πολλούς παράγοντες, πιστεύουμε ότι πιθανώς εμπλέκονται και άλλοι μηχανισμοί στην δράση της Ελευρωπαΐνης, η διερεύνηση των οποίων είναι αντικείμενο μελλοντικών μελετών.

scholarly journals Identification of Alkaloids from Corydalis yanhusuo W. T. Wang as Dopamine D1 Receptor Antagonists by Using CRE-Luciferase Reporter Gene Assay

Molecules ◽  
2018 ◽  
Vol 23 (10) ◽  
pp. 2585 ◽  
Author(s):  
Lehao Wu ◽  
Weiyue Zhang ◽  
Xin Qiu ◽  
Chaoran Wang ◽  
Yanfang Liu ◽  
...  
Keyword(s):  
Dopamine Receptors ◽  
Reporter Gene ◽  
Reporter Gene Assay ◽  
D1 Receptor ◽  
Assay System ◽  
Luciferase Reporter ◽  
Luciferase Reporter Gene ◽  
Luciferase Reporter Gene Assay ◽  
Antagonistic Effects ◽  
Gene Assay

Corydalis yanhusuo W. T. Wang (C. yanhusuo) has been traditionally used for drug addiction and pain relief in China. In our previous study, we showed that the extract of C. yanhusuo blocks dopamine receptors, demonstrating that its pharmacological activities are mostly due to the antagonistic effects of some of its components at dopamine receptors. As part of our ongoing project on C. yanhusuo, the aim of the present study is to establish a high-throughput and low-cost screening assay system and test the abilities of the isolated alkaloids from C. yanhusuo to inhibit dopamine-induced dopamine D1 receptor activity. By using our established cyclic adenosine monophosphate (cAMP)-response element (CRE)-luciferase reporter gene assay system, we identified eight alkaloids from C. yanhusuo with D1 receptor antagonistic activities. We next validated the activities of these compounds using fluorometric imaging plate reader (FLIPR) assay by measuring the intracellular Ca2+ change. Six out of eight compounds, including tetrahydropalmatine, corydaline, 13-methyldehydrocorydalmine, dehydrocorybubine, dehydrocorydaline, and columbamine, can be confirmed for their inhibitory activities. The dopamine-receptor-antagonistic effects of four compounds, including 13-methyldehydrocorydalmine, dehydrocorydaline, columbamine, and corydaline, are reported for the first time. The present study provides an important pharmacological basis to support the traditional use of C. yanhusuo in China.

scholarly journals Circ_0000005 Facilitates Proliferation, Apoptosis, Migration and Invasion of Acute Myeloid Leukemia Cells via Modulating miR-139-5p/Tspan3 Axis

2020 ◽  
Author(s):  
Juan Tong ◽  
Huilan Liu ◽  
Changcheng Zheng ◽  
Xiaoyu Zhu ◽  
Xiang Wan ◽  
...  
Keyword(s):  
Western Blot ◽  
Cell Lines ◽  
Reporter Gene ◽  
Reporter Gene Assay ◽  
Luciferase Reporter ◽  
Regulatory Function ◽  
Luciferase Reporter Gene ◽  
Luciferase Reporter Gene Assay ◽  
Qrt Pcr ◽  
Gene Assay

Abstract Background: Accumulating circular RNAs (circRNAs) are reported to be abnormally expressed in diverse cancers, hematologic malignancies included. This study aimed to investigate the biological function and underlying mechanisms of circ_0000005 in acute myeloid leukemia (AML).Materials and methods: Bone marrow samples were enrolled from AML patients with normal samples as controls. Circ_0000005, miR-139-5p and tetraspanin 3 (Tspan3) were detected by qRT-PCR and Western blot, respectively. AML cell lines (KG1 and HL60) were used as cell models. CCK-8, Transwell and flow cytometry assays were adopted to study the biological functions of circ_0000005 on AML cells in vitro. The interrelation between circ_0000005 and miR-139-5p was detected by bioinformatics, qRT-PCR, luciferase reporter gene assay, RNA pull-down assay, and RNA-binding protein immunoprecipitation (RIP) assays. Ultimately, Western blot, qRT-PCR, luciferase reporter gene assay were adopted to corroborate the interrelation between miR-139-5p and its target Tspan3. Results: Circ_0000005 was demonstrably elevated in both AML clinical samples and cell lines. Circ_0000005 overexpression promoted the viability, migration and invasion of AML cells, and repressed the apoptosis of AML cells, while silencing circ_0000005 showed opposite biological effects. Circ_0000005 interacted with miR-139-5p and repressed its expression, and Tspan3 was proved to be negatively regulated by miR-139-5p. Circ_0000005 could promote the expression of Tspan3 via repressing miR-139-5p, and the oncogenic functions of circ_0000005 were dependent on its regulatory function on miR-139-5p/Tspan3 axis.Conclusion: Circ_0000005 facilitates the malignant phenotypes of AML cells via miR-139-5p/Tspan3 axis. Circ_0000005 may serve as a potential therapeutic target in AML.

Circular RNA CCDC66 Regulates Osteoarthritis Progression by Targeting miR-3622b-5p

Gerontology ◽  
2022 ◽  
pp. 1-11
Author(s):  
Chengyuan Zhang ◽  
Ye Lu ◽  
Feng Yuan ◽  
Shilin Jiang
Keyword(s):  
Reporter Gene ◽  
Bioinformatics Analysis ◽  
Reporter Gene Assay ◽  
Luciferase Reporter ◽  
Chondrocyte Apoptosis ◽  
Luciferase Reporter Gene ◽  
Luciferase Reporter Gene Assay ◽  
Tnf Α ◽  
Gene Assay ◽  
Sirt3 Expression

<b><i>Objective:</i></b> CircCCDC66 is involved in cancer progression, but its role in osteoarthritis (OA) remains unknown. This study was carried out to explore the biological role of circCCDC66 in OA and its underlying mechanism. <b><i>Methods:</i></b> The expression levels of miR-3622b-5p and circCCDC66 in OA cartilage tissues were detected by qRT-PCR. Cell Counting Kit-8 (CCK8) and flow cytometry were used to detect the chondrocyte viability and apoptosis. The expression of chondrocyte inflammatory factors (IL-6 and TNF-α) was measured by ELISA. The target genes of circCCDC66 and miR-3622b-5p were analyzed by bioinformatics analysis and luciferase reporter gene assay. The relationship between circCCDC66 and miR-3622b-5p was analyzed by bioinformatics analysis and luciferase reporter gene assay. <b><i>Results:</i></b> It was found that circCCDC66 expression in OA cartilage tissues was upregulated. CircCCDC66 overexpression inhibited proliferation and promoted apoptosis of chondrocytes and increased IL-6 and TNF-α levels in chondrocytes. miR-3622b-5p was predicted to be a downstream target gene of circCCDC66, and circCCDC66 overexpression inhibited miR-3622b-5p expression in chondrocytes. Moreover, miR-3622b-5p expression was downregulated in OA cartilage tissues. miR-3622b-5p overexpression increased chondrocyte proliferation, inhibited chondrocyte apoptosis, and enhanced the expression of IL-6 and TNF-α in chondrocytes. In addition, circCCDC66 overexpression enhanced SIRT3 expression in chondrocytes, while miR-3622b-5p overexpression inhibited SIRT3 expression in chondrocytes. <b><i>Conclusion:</i></b> CircCCDC66 promoted OA chondrocyte apoptosis by regulating the miR-3622b-5p/SIRT3 axis. CircCCDC66 may be a new therapeutic target of OA.

Sign in / Sign up

Export Citation Format

Share Document