DIN CEN/TS 17329-1:2021-09, Lebensmittel_- Allgemeine Anleitung für die Validierung qualitativer Realtime-PCR-Verfahren_- Teil_1: Einzellaborvalidierung; Deutsche Fassung CEN/TS_17329-1:2021

Background: Chronic liver damages from viral infection or alcohol abuse result in liver fibrosis, which is a key pathological event in many types of liver diseases. Discovering new anti-fibrosis agents may provide alternative solutions to manage chronic liver diseases. Methods: We first used CCl4 induced liver fibrosis animal model to evaluate the beneficial effects of Cryptotanshinone (CRY). We next explored target miRNAs regulated by CRY in hepatocytes using microarray. The target miRNA candidate was confirmed with realtime-PCR. We also elucidated the downstream target and pathway directly regulated by the miRNA using luciferase assay, western blotting and Epithelial–Mesenchymal Transition (EMT) markers quantification. Lastly, we confirmed CRY induced expression changes of the target genes in vivo. Results: CRY oral administration markedly alleviated the liver injury caused by CCl4. miRNAs expression profiling and realtime-PCR validation revealed miR-539-3p was directly induced by CRY around 4 folds. The induction of miR-539-3p suppressed SMO expression and antagonized Hedgehog (Hh) pathway. Independently CRY treatment suppressed SMO and inhibited EMT process in hepatocytes. The CRY induced expression changes of both miR-539-3p (~ 2 folds increase) and SMO (~ 60% decrease) in livers were validated in animal model. Conclusion: Our study supported CRY could inhibit liver fibrosis by targeting Hh pathway during EMT. CRY could be used as anti-fibrosis agent candidate for managing chronic liver damages.

Download Full-text

Chuẩn hóa kỹ thuật Realtime PCR phát hiện vi khuẩn Leptospira từ bệnh phẩm lâm sàng tại Việt Nam

Tạp chí Y học Dự phòng ◽

10.51403/0868-2836/2021/371 ◽

2021 ◽

Vol 31 (6) ◽

pp. 29-40

Author(s):

Lương Minh Hòa ◽

Hoàng Thị Thu Hà ◽

Đỗ Bích Ngọc ◽

Lê Thị Phương Mai ◽

Nguyễn Tự Quyết ◽

...

Keyword(s):

Viet Nam ◽

Mau Mau ◽

Realtime Pcr

Leptospirosis là bệnh của động vật truyền sang người, do vi khuẩn Leptospira gây nên. Bệnh có đặc điểm lâm sàng đa dạng, dễ bị chẩn đoán nhầm với các bệnh nhiễm khuẩn khác. Do vậy việc chẩn đoán sớm bệnh ở giai đoạn đầu có giá trị rất quan trọng trong điều trị cho bệnh nhân. Kỹ thuật realtime PCR phát hiện được vi khuẩn Leptospira gây bệnh ở ngay giai đoạn đầu của bệnh, đã được ứng dụng ở nhiều nước trên thế giới và được coi là phương pháp tối ưu trong chẩn đoán sớm các bệnh nhân nghi ngờ mắc Leptospirosis. Trong nghiên cứu này, realtime PCR sử dụng mồi và đầu dò được thiết kế dựa trên trình tự nucleotide của gen lipL32, gen độc lực quan trọng và có ở tất cả các loài Leptospira gây bệnh. Kỹ thuật được chuẩn hoá với độ đặc hiệu 100% và ngưỡng phát hiện tối thiểu là 9 bản sao/phản ứng. Ứng dụng kỹ thuật này phát hiện Leptospira trong 120 mẫu máu và nước tiểu được thu thập từ bệnh nhân, đã xác định được tỷ lệ Leptospira dương tính là 1,7% (2/120). Việc áp dụng realtime PCR này là hữu ích và khả thi tại các phòng xét nghiệm tuyến tỉnh/thành phố tại Việt Nam.

Download Full-text

Leptospira Survey in Wild Boar (Sus scrofa) Hunted in Tuscany, Central Italy

Pathogens ◽

10.3390/pathogens9050377 ◽

2020 ◽

Vol 9 (5) ◽

pp. 377 ◽

Cited By ~ 4

Author(s):

Giovanni Cilia ◽

Fabrizio Bertelloni ◽

Marta Angelini ◽

Domenico Cerri ◽

Filippo Fratini

Keyword(s):

16S Rrna ◽

Wild Boar ◽

Sus Scrofa ◽

Central Italy ◽

23S Rrna ◽

Rrna Gene ◽

Pathogenic Leptospira ◽

Molecular Assays ◽

Realtime Pcr ◽

23S Rrna Gene

Leptospirosis is a re-emerging, worldwide zoonosis, and wild boar (Sus scrofa) are involved in its epidemiology as the reservoir. The aim of this study was to investigate the prevalence of Leptospira with serological, bacteriological, and molecular assays in wild boar hunted in Tuscany (Italy) during two hunting seasons. In total, 287 specimens of sera, kidneys, and liver were collected to perform microscopic agglutination tests (MATs), isolation, and RealTime PCR to detect pathogenic (lipL32 gene), intermediate (16S rRNA gene), and saprophytic (23S rRNA gene) Leptospira. Within sera, 39 (13.59%) were positive to the MAT, and Australis was the most represented serogroup (4.88%), followed by Pomona (4.18%), and Tarassovi (3.14%). Moreover, four Leptospira cultures were positive, and once isolates were identified, one was identified as L. borgpetersenii serovar Tarassovi, and three as L. interrogans serovar Bratislava. Pathogenic Leptospira DNA were detected in 32 wild boar kidneys (11.15%). The characterization through the amplification of the rrs2 gene highlighted their belonging to L. interrogans (23 kidneys), L. borgpetersenii (four), and L. kirschneri (one), while nine kidneys (3.14%) were positive for intermediate Leptospira, all belonging to L. fainei. The results of this study confirmed the importance of wild boar in the epidemiology of leptospirosis among wildlife in Central Italy.

Download Full-text

Caries activity test by realtime PCR method and bacterial cultural method

Journal of Korean Academy of Oral Health ◽

10.11149/jkaoh.2020.44.3.126 ◽

2020 ◽

Vol 44 (3) ◽

pp. 126-129

Author(s):

Joung-Hee Yun ◽

Ji-Hyeon Park ◽

Ja-Won Cho ◽

Sung-Won Kim

Keyword(s):

Caries Activity ◽

Realtime Pcr ◽

Activity Test ◽

Cultural Method ◽

Pcr Method

Download Full-text

Faktor Risiko yang Memengaruhi Kolonisasi Mikroflora Saluran Cerna Neonatus Kurang Bulan dengan Enterokolitis Nekrotikans

Sari Pediatri ◽

10.14238/sp15.6.2014.353-60 ◽

2016 ◽

Vol 15 (6) ◽

pp. 353 ◽

Cited By ~ 1

Author(s):

Ratno Juniarto Marulitua Sidauruk ◽

Idham Amir ◽

Muzal Kadim ◽

Mardjanis Said

Keyword(s):

Necrotizing Enterocolitis ◽

E Coli ◽

Realtime Pcr

Latar belakang. Insiden enterokolitis nekrotikans (necrotizing enterocolitis,NEC) sekitar 1 per 1000 kelahiran hidup, dan 90% terjadi pada neonatus kurang bulan (NKB). Patofisiologi NEC belum jelas, salah satu penyebabnya diduga akibat kolonisasi mikroflora yang abnormal. Faktor risiko yang dapat memengaruhi kolonisasi mikroflora saluran cerna, yaitu cara persalinan, lama pemakaian antibiotik, dan tipe nutrisi.Tujuan. Mengetahui proporsi mikroflora pada NKB dengan dan tanpa NEC serta faktor risiko yang memengaruhi kolonisasi mikroflora saluran cerna NKB dengan NEC.Metode. Penelitian potong lintang dilakukan pada NKB dengan NEC derajat II selama periode Maret-Oktober 2012. Dilakukan pemeriksaan tinja dengan quantitative realtime PCR untuk mendeteksi kolonisasi mikroflora B. lactis, L. acidophilus, Bifidobacterium sp., Lactobacillus sp., E. coli, C. difficile, dan K. pneumoniae.Hasil. Tigapuluh subjek NKB dengan NEC dan 10 subjek NKB tanpa NEC diikutsertakan dalam penelitian. Pada subjek NEC, K. pneumoniae terdeteksi dengan median proporsi 15,2%, Bifidobacterium sp. 13,4%, E. coli 1,0%, Lactobacillus sp. 0,1%, B. lactis 0,0%, C. difficile 0,0%, dan L. acidophilus 0,00% (0,0-1,8%). Pada subjek tanpa NEC, Bifidobacterium sp. terdeteksi dengan proporsi 29,5%, K. pneumoniae 0,9%, E. coli 0,3%, Lactobacillus sp. 2,3%, B. lactis 0,0%, C. difficile 0,0%, sedang L. acidophilus tidak terdeteksi. Tidak ditemukan perbedaan proporsi ketujuh mikroflora yang bermakna secara statistik pada NKB dengan NEC berdasarkan cara persalinan, lama mendapat antibiotik, dan tipe nutrisi (p>0,05).Kesimpulan. K.pneumoniae memiliki proporsi terbesar pada subjek NEC, sedangkan Bifidobacterium sp. pada subjek tanpa NEC. Cara persalinan, lama pemakaian antibiotik, dan tipe nutrisi tidak memengaruhi proporsi kolonisasi mikroflora saluran cerna subjek NEC.

Download Full-text