Avaliação da microbiota bacteriana conjuntival de cães hígidos atendidos no Hospital Veterinário da Universidade de Marília

A microbiota conjuntival dos cães é formada por uma associação de micro-organismos normalmente não patogênicos, que interagem com o sistema imune do animal e possui função de atuar como barreira natural contra entrada de agentes patogênicos. O presente trabalho foi delineado para investigar os micro-organismos presentes na conjuntiva de cães sadios. Foram utilizados 25 cães sadios da rotina clínico cirúrgica do hospital veterinário da Unimar e após instilar uma gota de colírio anestésico em cada olho colheu-se amostra conjuntival superior e inferior de ambos os olhos com swab etéril, preservando a amostra em meio Stuart e logo após cultivada em meios BHI (Brain Heart Infusion), Ágar sangue de carneiro 6%, Ágar MacConkey e Ágar TSA. Após o crescimento bacteriano foi realizada a identificação dos micro-organismos cultivados por meio de testes de triagem bioquímica como oxidase e catalase, além da análise da morfologia bacteriana em lâmina, padrão e coloração de crescimento em ágar. Houve crescimento bacteriano em amostras colhidas de 20 animais das quais 38% dos isolados foram compatíveis com S. intermedius; 30% de Bacilo sp. e 10% S. aureus. A espécie Staphylococcus sp. é natural de membranas mucosas, não sendo patogênica ao animal. Foi, portanto, constatada a predominância de S. intermedius nas amostras da microbiota do olho dos cães sadios examinados.

Análise da atividade antimicrobiana de probióticos e sua adesividade a bráquetes ortodônticos: estudo in vitro

Resumo Introdução A presença de aparelho ortodôntico fixo dificulta a higienização e potencializa o acúmulo de biofilme bacteriano nas superfícies dentárias. O desenvolvimento de produtos que minimize isso é desejo de pesquisadores em todo o mundo. Objetivo Verificar a ação bacterapêutica de produtos lácteos contendo ou não probióticos sob pool de Streptococcus mutans (SM) (ATCC 25175) e S salivarius (SS) (ATCC 7073), além da adesão desses produtos à superfície de bráquetes ortodônticos. Material e método Pool de cepas ATCC de SM e SS foi formado e plaqueado sobre placa de Petri contendo meio de cultura brain heart infusion ágar (BHI). Após formação do meio, um orifício foi feito no centro da placa seguido do seu preenchimento com 150 µL dos produtos a serem testados, formando os seguintes grupos: GL - Leite bovino; GLP - Leite bovino com probiótico; GLF - Leite fermentado; e GLFP - Leite fermentado com probiótico. Na sequência, as placas foram incubadas por 48h, em estufa a 37ºC. A seguir, foi feita a medição do halo formado entre o produto e o meio com régua milimetrada. Já no disco de membrana, foi formado biofilme com o mesmo pool de cepas, sob discos de membrana. Em seguida, foi feita a diluição seriada contendo o produto de acordo com o grupo: P1 (água); P2 (L); P3 (LP); P4 (LFP), seguida do plaqueamento e a contagem total de micro-organismos. Para a adesividade dos produtos lácteos, bráquetes ortodônticos foram submergidos em cada solução (GL, GLP, GLF e GLFP) e foram incubadas a 37°C/24h. Posteriormente, cada bráquete foi transferido para um ependorf contendo solução salina estéril, que foi submetida a diluições seriadas, posteriormente incubadas a 37°C/48h sob microaerofilia para contagem das UFC/mL. Para análise dos dados, utilizaram-se os testes Levene, Shapiro-Wilk e Kruskal-Wallis. O nível de significância adotado foi de 5% (α = 0,05). Resultado Não houve formação de halo de inibição entre os produtos e o meio de cultura (p<0,05); no disco de membrana, não foram observadas diferenças estatísticas entre os grupos (p=0,679); os grupos tratados com leite bovino com probiótico e leite fermentado com probiótico apresentaram adesividade aos bráquetes ortodônticos (p=0,056). Conclusão Os achados do presente estudo permitem concluir que, em estudos in vitro, não foi possível verificar a bacterioterapia a partir de produtos lácteos contendo ou não probióticos em cepas de SM e SS.

Brain Heart Infusion Agar : A Surrogate of Agar Blood

Blood agar is needed for culture of various organisms. As sheep blood is needed for it’s preparation, many small laboratories specially those of rural areas can not prepare it due to difficulty in collection of sheep blood. So, either they do not do the culture or do it without blood agar which cause missing of some important organisms. In this study Brain heart infusion agar was used together with Blood agar to assess it’s efficacy as an alternative of Blood agar. In total 1256 various samples were cultured, on Blood agar , Brain heart Infusion agar and MacConkey agar. Out of 1256 samples 404 samples showed growth of various organisms. It was noted that all bacteria including Enterococcus sp. grew equally in blood agar and BHIA. Brain heart infusion agar can be used as a surrogate of blood agar. Bangladesh J Med Microbiol 2018; 12 (1): 24-26

ANÁLISE DA CONTAMINAÇÃO MICROBIANA NAS ETAPAS DE PROCESSAMENTO E FERMENTAÇÃO DA CANA DE AÇÚCAR EM UMA USINA SUCROALCOOLEIRA

O Brasil possui aproximadamente 400 usinas de processamento de cana-de-açúcar, sendo o estado de São Paulo responsável por cerca de 60% da produção nacional. Na produção de etanol, o caldo passa por tratamento térmico e decantação, sendo então resfriado e enviado para as dornas de alimentação, nas quais adiciona-se fermento. Nessa fase, pode ocorrer contaminação por bactérias que competem com a levedura pela glicose e frutose, podendo reduzir a produção. O trabalho objetivou quantificar a contaminação bacteriana nas diferentes fases de processamento em uma usina sucroalcooleira e identificar quais gêneros competem no processo fermentativo. Para isto, foram coletadas amostras nas diferentes fases visando análise do pH, viabilidade e contaminação microbiana. Para identificação das bactérias contaminantes, 0,2 ml das amostras foram inoculados em meio de cultura ágar BHI ("Brain Heart Infusion Agar"), incubados a 37º/ 24 horas e após, seleção de colônias para coloração de Gram. O pH variou de 4,5 a 4,6, sendo que a acidificação previne a contaminação. A viabilidade das leveduras apresentou valores de 92,50% a 90,60%, estando dentro dos padrões adequados. A maior contaminação bacteriana foi encontrada na entrada de caldo misto da moenda (107 UFC), diminuindo com a redução de pH e acréscimo do antibiótico monensina a 18%. Pela análise microscópica, detectaram-se cocos Gram-positivos dos gêneros Leuconostoc e Lactobacillus, descritos como principais contaminantes do processo, além de bacilos Gram-negativos, provavelmente Klebsiella e, Enterobacter. A contaminação bacteriana compete com a levedura Saccharomyces cerevisae pelo substrato, ocasionando prejuízos no rendimento e na produtividade da usina

ISOLASI BAKTERIOFAGA ANTI Streptococcus agalactiae DARI IKAN NILA (Oreochromis niloticus)

Infeksi Streptococcus merupakan salah satu penyakit serius pada ikan yang disebabkan oleh bakteri gram positif. Infeksi oleh streptococcus beta-hemolitik paling sering dilaporkan menginfeksi ikan. Di antara streptococci beta-hemolitik, Streptococcus iniae penyebab septicemia, meningoencefalitis, dan kematian pada ikan budidaya. Selain itu, Streptococcus agalactiae juga menyebabkan streptococcosis parah pada ikan nila. Alternatif yang bisa digunakan untuk terapi infeksi streptococcosis adalah dengan penggunaan bakteriofaga yang merupakan virus yang hidup pada bakteri. Tujuan penelitian ini adalah isolasi bakteriofaga S. agalactiae sebagai kandidat agen terapi yang memberikan efek protektif melawan infeksi streptococcosis. Faga diisolasi dari Brain Heart Infusion Agar (BHIA) yang sudah ditanami dengan 15 isolat S. iniae dan S. agalactiae. Isolat S. iniae dan S. agalactiae diisolasi dari ikan sakit dengan gejala klinis Streptococcosis. Setelah itu diidentifikasi dengan pewarnaan Gram, tes katalase, pertumbuhan pada agar darah dan API 20 Strep System. Pertumbuhan faga ditunjukkan dengan adanya zona lisis pada tempat yang ditetesi dengan sampel cairan usus dari ikan nila sehat. Faga yang tumbuh lalu dikoleksi secara steril, disentrifus dan supernatannya difiltrasi dengan membran filter 0,45 µm dan disimpan pada suhu 4oC. Dari 15 isolat S. iniae dan S. agalactiae hanya satu isolat yaitu PSaT-18 yang menunjukkan zona lisis seperti yang ditunjukkan pada cawan petri isolat kontrol S. iniae. Zona lisis tersebut timbul akibat adanya faga yang memberikan proteksi terhadap S. iniae dan S. agalactiae. Zona lisis yang tidak jernih disebabkan konsentrasi faga yang terlalu rendah akibat dilakukan pengenceran pada proses filtrasi. Faga yang diperoleh selanjutnya akan dilakukan uji in vitro dan in vivo untuk mengetahui efektivitasnya.Streptococcal infection is a serious disease in fish caused by gram positive bacteria. The causative agent is Streptococcus b-hemolytic. Streptococcus iniae, a b-hemolytic bacterium is the main causative agent of septicemia, meningoencephalitis, and fish mortality. Moreover, the other causative agent is S. agalactiae. Bacteriophages which are viruses that live on bacteria can be selected and used as therapy for Streptococcosis. The aim of this research is to isolate bacteriophage of S. agalactiae as therapeutic agent candidate giving protecting effect for Streptococcosis. Phages was isolated from Brain Heart Infusion Agar (BHIA) were obtained from cultures of S. iniae and S. agalactiae. Strains S. iniae and S. agalactiae were isolated from Streptococcosis fish. The predominant types of colonies were subcultured and subjected to biochemical and physiological tests such as Gram staining, catalase test, hemolytic activity in blood agar and API 20 Strep System. Phages were isolated by using a double agar layer method. A zona lysis with plaques was removed from the plate, centrifuged and the supernatant was filtered through a 0.45 µm membrane filter and stored at 4oC. From 15 isolates of S. iniae and S. agalactiae, only one isolate PSaT-18 showed lysis zone. The lysis zone developed because the phages give protection to S. agalactiae. The lysis zone is not clear because the phage concentration is too low and the dilution in filtration process is too high. Later, these phages were used for invitro and invivo test.

Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus Grown on Vancomycin-Supplemented Screening Agar Displays Enhanced Biofilm Formation

ABSTRACTBrain heart infusion agar containing 3 mg/liter vancomycin (BHI-V3) was used to screen for heterogeneous vancomycin-intermediateStaphylococcus aureus(hVISA). There was markedly greater biofilm formation by isolates that grew on BHI-V3 than by strains that did not grow on BHI-V3. Increased biofilm formation by hVISA may be mediated by FnbA- and polysaccharide intercellular adhesin-dependent pathways, and upregulation ofatlAandsarAmay also contribute to enhanced biofilm formation by hVISA upon prolonged exposure to vancomycin.

qnrD, a Novel Gene Conferring Transferable Quinolone Resistance in Salmonella enterica Serovar Kentucky and Bovismorbificans Strains of Human Origin

ABSTRACT In a previous study, four Salmonella isolates from humans in the Henan province of China showed reduced susceptibility to ciprofloxacin (MIC, 0.125 to 0.25 μg/ml) but were susceptible to nalidixic acid (MIC, 4 to 8 μg/ml). All isolates were negative for known qnr genes (A, B, and S), aac(6′)Ib-cr, and mutations in gyrA and parC. Plasmid DNA was extracted from all four isolates and transformed into Escherichia coli TG1 and DH10B cells by electroporation, and transformants were selected on 0.06 μg/ml ciprofloxacin containing brain heart infusion agar plates. Resistance to ciprofloxacin could be transferred by electroporation, and a similar 4,270-bp plasmid was found in all transformants. By sequence analysis, the plasmid was found to carry an open reading frame that had similarities to other qnr genes and that encoded a 214-amino-acid pentapeptide repeat protein. This gene, designated qnrD, showed 48% similarity to qnrA1, 61% similarity to qnrB1, and 41% similarity to qnrS1. Further subcloning of the qnrD coding region into the constitutively expressed tetA gene of vector pBR322 showed that the gene conferred an increase in the MIC of ciprofloxacin by a factor of 32 (from an MIC of 0.002 to an MIC of 0.06 μg/ml). For comparison, qnrA1 and qnrS1 were also subcloned into pBR322 and transformed into DH10B cells, conferring MICs of 0.125 and 0.5 μg/ml, respectively. A phylogenetic analysis of all known qnr sequences was performed and showed that qnrD was more closely related to the qnrB variants but formed an independent cluster. To our knowledge, this is the first description of this qnrD gene.

Emergence in Asian Countries of Staphylococcus aureus with Reduced Susceptibility to Vancomycin

ABSTRACT To investigate the prevalence of Staphylococcus aureus with reduced susceptibility to vancomycin among methicillin-resistant S. aureus (MRSA) strains in Asian countries, a total of 1,357 clinical isolates of MRSA collected from 12 Asian countries were screened by using brain heart infusion agar plates containing 4 mg of vancomycin per liter. The presence of strains that were heterointermediately resistant to vancomycin (hVISA) was confirmed by population analysis. Of 347 (25.6%) MRSA isolates that grew on the screening agar plates, 58 isolates (4.3%) were hVISA. hVISA strains were found in India, South Korea, Japan, the Philippines, Singapore, Thailand, and Vietnam. However, neither vancomycin-intermediate S. aureus nor vancomycin-resistant S. aureus isolates were found among MRSA isolates from Asian countries in this survey.

Inactivation of Listeria monocytogenes Scott A 49594 in Apple Juice Supplemented with Cinnamon

Normal (pH 3.7) and adjusted (pH 5.0) pasteurized apple juice containing cinnamon (0, 0.1, 0.2, and 0.3%) was inoculated with Listeria monocytogenes Scott A 49594 at 104 CFU/ml and stored at 5 and 20°C for 7 days. Counts on tryptic soy agar (TSA), modified Oxford (MOX) medium, and thin agar layer (TAL) were determined at 1 h and 1, 3, and 7 days. The TAL method (MOX medium overlaid with TSA) was used for the recovery of injured cells. In apple juice, both at normal and adjusted pH, with any doses of cinnamon, no L. monocytogenes (a 4.6-log CFU/ml reduction) was detected after 1 h of storage at both temperatures, and no growth occurred at any points of storage. Therefore, cinnamon by itself (regardless of pH) had a pronounced killing effect. A further enrichment step with brain heart infusion agar showed that L. monocytogenes was completely inactivated in apple juice stored at 20°C, except in pH 5.0 samples with 0.1% of cinnamon. The TAL method was as effective as TSA in recovering injured cells of L. monocytogenes. Cinnamon considerably inactivates L. monocytogenes in apple juice and thus enhances the safety of this product.