Optical cytosensors for detection of circulating tumour cells

Profiling circulating tumour cells (CTCs) in cancer patients’ blood samples is critical to understanding the complex and dynamic nature of metastasis. This task is challenged by the fact that CTCs...

Download Full-text

Υγρή βιοψία

10.12681/eadd/45495 ◽

2019 ◽

Author(s):

Μάρθα Ζαβρίδου

Keyword(s):

Nucleic Acids ◽

Cancer Treatment ◽

Tumor Cells ◽

Circulating Tumor Cells ◽

Circulating Tumor Dna ◽

Tumour Cells ◽

Full Length ◽

Circulating Tumour Cells ◽

Roche Diagnostics ◽

Tumor Dna

Η «υγρή βιοψία», βασισμένη στην ανάλυση των κυκλοφορούντων καρκινικών κυττάρων (circulating tumor cells, CTCs), του εξωκυττάριου καρκινικού DNA (circulating tumor DNA, ctDNA), των miRNAs και των εξωσωμάτων παρέχει μια μη-επεμβατική παρακολούθηση της εξέλιξης της νόσου και της αποτελεσματικότητας της θεραπείας, σε πραγματικό χρόνο.Στην παρούσα διδακτορική διατριβή, αρχικά αξιολογήσαμε την επίδραση των προαναλυτικών συνθηκών για την ανάλυση γονιδιακής έκφρασης στα CTCs. Για το σκοπό αυτό πραγματοποιήθηκαν πειράματα εμβολιασμού 100 MCF7 σε σωληνάρια συλλογής περιφερικού αίματος, με διαφορετική σύσταση αντιπηκτικού και συντηρητικών των κυττάρων. Στη συνέχεια ακολούθησε η απομόνωση των CTCs με EpCAM-θετικό ανοσομαγνητικό εμπλουτισμό σε διαστήματα 0h, 24h και 48h και ποσοτικός προσδιορισμός της έκφρασης των γονιδίων B2M και CK-19 στα CTCs με RT-qPCR. Παράλληλα, προτείνουμε μια ολοκληρωμένη διαδικασία ελέγχου ποιότητας όλων των βημάτων που συμπεριλαμβάνονται στην πειραματική πορεία για αναλύσεις γονιδιακής έκφρασης σε δείγματα υγρής βιοψίας. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι οι αναλύσεις των CTCs σε επίπεδο mRNA επηρεάζονται από τα συντηρητικά ή/και τα αντιπηκτικά που χρησιμοποιούνται στα περισσότερα σωληνάρια συλλογής περιφερικού αίματος.Στη συνέχεια, στόχο μας αποτέλεσε η επιλογή του βέλτιστου συστήματος απομόνωσης/εμπλουτισμού CTCs για το μοριακό χαρακτηρισμό τους στον HNSCC. Για αυτό το λόγο, πραγματοποιήθηκε για πρώτη φορά άμεση σύγκριση του συστήματος Parsortix, που βασίζεται σε σύστημα μικροροών για την απομόνωση/εμπλουτισμό των CTCs με βάση το μέγεθός τους, με τον ανοσομαγνητικό εμπλουτισμό των CTCs με βάση το EpCAM από το ίδιο περιφερικό αίμα ασθενών με HNSCC και προχωρήσαμε στη συνέχεια σε μοριακό χαρακτηρισμό των CTCs σε επίπεδο γονιδιακής έκφρασης. Τα αποτελέσματα της παρούσας μελέτης υποδεικνύουν σαφώς ότι ο πληθυσμός των CTCs που απομονώθηκε με το σύστημα Parsortix είναι υψηλότερης καθαρότητας σε σχέση με τον πληθυσμό των CTCs που απομονώθηκε με EpCAM θετικό ανοσομαγνητικό εμπλουτισμό. Επιπρόσθετα, αναπτύξαμε μεθοδολογία πολλαπλής RT-qPCR για τον ταυτόχρονο ποσοτικό προσδιορισμό της έκφρασης του υποδοχέα των ανδρογόνων (AR), AR-full length (AR-FL), των εναλλακτικών μεταγράφων του AR-V7 και AR-567 και του ολικού AR-total με ανιχνευτές υδρόλυσης στο όργανο Cobas z480 (Roche Diagnostics). Η αναπτυχθείσα μεθοδολογία εφαρμόστηκε και αξιολογήθηκε κλινικά στα CTCs και στα εξωσώματα που απομονώθηκαν από το πλάσμα ασθενών με μεταστατικό ευνουχοάντοχο καρκίνο προστάτη. Τα αποτελέσματά μας υποδεικνύουν ξεκάθαρα ότι η μέθοδος μπορεί να εφαρμοστεί τόσο στα CTCs όσο και στα εξωσώματα.Στο τελευταίο μέρος της διατριβής, διερευνήθηκε το μοριακό προφίλ των CTCs και των εξωσωμάτων ασθενών με ευνουχοάντοχο καρκίνο προστάτη. Πιο συγκεκριμένα, μελετήθηκε το προφίλ της έκφρασης των γονιδίων PD-L1, CK-19, των εναλλακτικών μεταγράφων AR-FL, AR-V7, AR-567 και AR-total, καθώς και το προφίλ μεθυλίωσης των γονιδίων GSTP1 και RASSF1A. Η διδακτορική διατριβή χρηματοδοτήθηκε από το Ευρωπαϊκό Πρόγραμμα IMI-CANCER-ID (αρ. συμβολαίου 115749): “Cancer treatment and monitoring through identification of circulating tumour cells and tumour related nucleic acids in blood” (https://www.cancer-id.eu/)

Download Full-text

Simultaneous in situ detection of protein expression of multiple tumor markers of circulating tumor cells and heteroploid of chromosome 8 in primary lung cancer

Annals of Translational Medicine ◽

10.21037/atm-21-6346 ◽

2021 ◽

Vol 0 (0) ◽

pp. 0-0

Author(s):

Hanqing Yao ◽

Zhengdong Wang ◽

Junjun Yang ◽

Xingxiang Xu ◽

Yong Song

Keyword(s):

Lung Cancer ◽

Protein Expression ◽

Tumor Cells ◽

Circulating Tumor Cells ◽

Tumor Markers ◽

Primary Lung Cancer ◽

Chromosome 8 ◽

Multiple Tumor ◽

In Situ Detection

Download Full-text

Serum Tumor Markers and Circulating Tumor Cells

Breast Cancer 2nd edition ◽

10.1007/978-0-387-34952-7_10 ◽

2008 ◽

pp. 309-322

Author(s):

Francisco J. Esteva ◽

Herbert A. Fritsche ◽

James M. Reuben ◽

Massimo Cristofanilli

Keyword(s):

Tumor Cells ◽

Circulating Tumor Cells ◽

Tumor Markers ◽

Serum Tumor Markers

Download Full-text

Clinical significance of circulating tumor cells and tumor markers in the diagnosis of lung cancer

Cancer Medicine ◽

10.1002/cam4.2286 ◽

2019 ◽

Vol 8 (8) ◽

pp. 3782-3792 ◽

Cited By ~ 1

Author(s):

Yang Li ◽

Xudong Tian ◽

Lei Gao ◽

Xiaohong Jiang ◽

Rao Fu ◽

...

Keyword(s):

Lung Cancer ◽

Tumor Cells ◽

Circulating Tumor Cells ◽

Tumor Markers ◽

Clinical Significance ◽

Diagnosis Of Lung Cancer

Download Full-text

Association of Metabolic, Inflammatory, and Tumor Markers With Circulating Tumor Cells in Metastatic Breast Cancer

JNCI Cancer Spectrum ◽

10.1093/jncics/pky028 ◽

2018 ◽

Vol 2 (2) ◽

Cited By ~ 3

Author(s):

Ana Elisa Lohmann ◽

Ryan J O Dowling ◽

Marguerite Ennis ◽

Eitan Amir ◽

Christine Elser ◽

...

Keyword(s):

Breast Cancer ◽

Metastatic Breast Cancer ◽

Tumor Cells ◽

Circulating Tumor Cells ◽

Tumor Markers ◽

Statistical Tests ◽

Metastatic Breast ◽

P Value ◽

Fisher Exact Test ◽

Plasminogen Activator Inhibitor 1

Abstract Background Circulating tumor cells (CTCs) are associated with worse prognosis in metastatic breast cancer (BC). We evaluated the association of metabolic, inflammatory, and tumor markers with CTCs in women with metastatic BC before commencing a new systemic therapy. Methods Ninety-six patients with newly diagnosed or progressing metastatic BC without current diabetes or use of anti-inflammatory agents were recruited from four Ontario hospitals. Women provided fasting blood for measurement of metabolic, inflammatory, and tumor markers and CTCs. CTCs were assayed within 72 hours of collection using CellSearch. Other blood was frozen at –80°C, and assays were performed in a single batch. Associations between CTC counts with study factors were evaluated using Spearman correlation, and the chi-square or Fisher exact test. All statistical tests were two-sided and P value ≤ .05 was considered statistically significant. Results The median age was 60.5 years; 90.6% were postmenopausal. The cohort included hormone receptor–positive (87.5%), HER2–positive (15.6%), and triple-negative (10.4%) BCs. Patients were starting firstline (35.5%), second-line (26.0%), or third-or-later-line therapy (38.5%). CTC counts (per 7.5 mL of blood) ranged from 0 to 1238 (median 2); an elevated CTC count, defined as five or more CTCs, was detected in 42 (43.8%) patients. Those with liver metastases (vs not) more frequently had an elevated CTC count (59.0% vs 33.3%, P = .02). CTCs were significantly associated with C-reactive protein (R = .22, P = .02), interleukin (IL)-6 (R = .25, P = .01), IL-8 (R = .38, P = .0001), plasminogen activator inhibitor 1 (R = .31, P = .001), carcinoembryonic antigen (R = .31, P = .002), and cancer antigen 15-3 (R = .40, P = .0001) and inversely associated with body mass index (R = –.23, P = .02) and leptin (R = –.26, P = .01). Conclusions CTC counts were positively associated with tumor and inflammatory markers and inversely associated with some metabolic markers, potentially reflecting tumor burden and cachexia.

Download Full-text