PERFIL EPIDEMIOLÓGICO DE FUNGEMIA EM HEMOCULTURA AUTOMATIZADA E EM CULTURA MICOLÓGICA

INTRODUÇÃO: As micoses sistêmicas representam um grande desafio mundial e ainda são um tema negligenciado pelas autoridades de saúde pública. Estima-se que mais de foram 300 milhões de pessoas em todo o mundo sofrem de infecções fúngicas a cada ano com cerca de 1,0 a 2,0 milhões de mortes. Sabe-se que o atraso do diagnóstico das micoses sistêmicas impossibilita o início da terapia antifúngica imediata podendo ocasionar mortes ou o agravamento destas. O diagnóstico micológico, usualmente, baseia-se na identificação dos fungos por meio da observação de suas características morfológicas, isolados do material clínico cultivado. No entanto, em se tratando de amostras sanguíneas, sistemas de hemocultura automatizados são utilizados. OBJETIVO: Este estudo teve como objetivo avaliar o perfil epidemiológico dos fungos isolados de amostras sanguíneas cultivados no sistema de hemocultura automatizado e nos meios usuais da micologia clássica. METODOLOGIA: Amostras sanguíneas de 596 pacientes internados no Hospital Eduardo de Menezes, Minas Gerais, no período de março de 2017 a dezembro de 2019, foram inoculadas pareadas nos meios ágar Sabouraud e ágar Mycosel e no frasco aeróbio do sistema BacT/ALERT®. RESULTADOS: Candida spp. 0,3% (2/596, IC 95% 0,09 - 1,22) Cryptococcus spp. 0,8% (5/596, IC 95% 0,36 - 1,95) e Sporothrix spp. 0,2 % (1/596, IC 95% 0,03 - 0,94) foram os fungos isolados na hemocultura automatizada. Por outro lado, recuperamos Cryptococcus spp. 1,0% (6/596, IC 95% 0,46 - 2,18), Histoplasma spp. 3,0% (18/596, IC 95% 1,92 - 4,72), Paracoccidioides spp. 0,5% (3/596, IC 95% 0,17 - 1,47) e Sporothrix spp. 0,2 % (1/596, IC 95% 0,03 - 0,94) nas culturas micológicas clássicas. CONCLUSÃO: Os fungos mostraram notável variabilidade entre os gêneros na preferência das metodologias utilizadas. Na prática, podemos concluir que as metodologias se complementam e dessa forma, a aplicação simultânea da hemocultura automatizada e das culturas micológicas em Sabouraud e Mycosel oferecem a possibilidade de detectar uma diversidade maior de agentes fúngicos e melhora a sensibilidade do diagnóstico. Palavras-chave: micoses sistêmicas, diagnóstico micológico, hemocultura automatizada.

Estudio epidemiológico de histoplasmosis, paracoccidioidomicosis y criptococosis en una zona urbana de Ciudad Guayana, estado Bolívar, Venezuela

Se realizó un estudio prospectivo con el objetivo de determinar la prevalencia de infecciones por Histoplasma capsulatum, Complejo Paracoccidioides spp. y Complejo Cryptoccocus en individuos que viven o trabajan en la Plaza de las Ciencias del Sur, Puerto Ordaz, en el estado Bolívar, Venezuela, donde se refugian aves migratorias. Se aplicó una encuesta clínico-epidemiológica y se administraron pruebas intradérmicas de histoplasmina y paracoccidiodina, a todos los sujetos participantes en el estudio. A aquellos individuos sintomáticos respiratorios crónicos, se les realizó una evaluación clínica, radiológica, cultivo micológico y estudio serológico (anticuerpos específicos para Histoplasma capsulatum, Complejo Paracoccidioides spp. y del antígeno capsular del Complejo Cryptococcus spp.). Se aplicaron 632 pruebas intradérmicas a 316 individuos. De estos, sólo 296 (93,7%) acudieron a la lectura de las pruebas. Los sujetos tenían una media de edad de 40,3 años (rango: 7-76 años). Las manifestaciones clínicas más frecuentes fueron: tos (n=49; 16,5%), expectoración (n=17; 5,7%) y fiebre (n=8; 2,7%). La prueba para la histoplasmina fue positiva en el 47,3% (n=140) y a la paracoccidioidina, en el 32,4% (n=96). Los factores de riesgos fueron: contacto con palomas 30,4% (n=90) y visitas a fincas con gallineros 29,1% (n=86). Se identificaron dos casos de paracoccidioidomicosis pulmonar (0,7%) y un caso (0,3%) de criptococosis pulmonar. La elevada prevalencia de infección por Histoplasma capsulatum (47,3%) y Paracoccidioides spp. (32,4%) en ambientes urbanos del estado Bolívar, demuestra la necesidad de promover la búsqueda activa de estos hongos patógenos en quienes tienen síntomas respiratorios crónicos, que no mejoran con terapia antibacteriana y que habitan en zonas con características ambientales y geográficas, propicias para el desarrollo de estos hongos.

Detección de anticuerpos contra Histoplasma capsulatum, complejo Paracoccidioides y complejo Sporothrix schenckii en Canis familiaris, mediante la prueba de inmunodifusión en gel de agarosa. municipio Caroní, estado Bolívar, Venezuela

Los hongos dimórficos, Histoplasma capsulatum, complejo Paracoccidioides spp. y complejo Sporothrix schenckii son los agentes causales de la histoplasmosis, paracoccidioidomicosis y esporotricosis, respectivamente. El objetivo de este estudio fue evaluar la presencia de anticuerpos contra H. capsulatum, complejo Paracoccidioides spp. y complejo Sporothrix schenckii en perros domésticos (Canis familiaris) del municipio Caroní, estado Bolívar, Venezuela. Se realizó un estudio prospectivo, descriptivo y transversal. Se recolectaron al azar 200 muestras de suero de igual número de perros pertenecientes a 10 localidades del municipio Caroní. Mediante la técnica de inmunodifusión en gel de agarosa, se buscaron anticuerpos específicos contra antígenos de H. capsulatum, complejo Paracoccidioides spp. y complejo Sporothrix schenckii. El 9,0% (n=18) de los caninos estudiados mostraron anticuerpos contra H. capsulatum, 7,0% (n=14) contra Paracoccidioides spp., 1,0% (n=2) para ambos hongos y 1,5% (n=3) para complejo Sporothrix schenckii; siendo ubicados, la mayoría de estos, en las localidades de San Félix y Unare. La detección de anticuerpos específicos contra Histoplasma capsulatum, complejo Paracoccidioides spp. y complejo S. schenckii en los perros, sugiere que estos agentes están presentes en el municipio Caroní. Probablemente, los humanos que habitan esta zona tengan una exposición similar a estos hongos y por tanto, el diagnóstico de las condiciones causadas por estos agentes debe ser considerado en esta área geográfica.

Paracoccidioidomicosis diseminada en paciente inmunocompetente: reporte de caso

La Paracoccidioidomicosis (PCM) es una infección micótica endémica en Latinoamérica que se caracteriza por compromiso multiorgánico. El diagnóstico tardío y la diseminación sistémica favorecen complicaciones como falla respiratoria e insuficiencia suprarrenal que condicionan el desenlace del paciente. Se presenta el caso de un paciente de 51 años de edad, procedente de la costa pacífica colombiana, inmunocompetente con PCM diseminada a sistema nervioso central (SNC), pulmones y glándulas suprarrenales con debut clínico de síndrome neurológico. Durante estancia hospitalaria presenta pico febril, colapso hemodinámico, acidosis metabólica severa e hiperlactatemia. Se hemocultivó e inició tratamiento antimicrobiano de amplio espectro con piperacilina-tazobactam (4.5 gr/IV cada 8 horas), vancomicina (15 mg/kg) más anfotericina B desoxicolato (1 mg/kg/dia) y se trasladó a unidad de cuidado intensivo. En la muestras de tejido suprarrenal se identificaron levaduras multigemantes de Paracoccidioides spp e inflamacion crónica granulomatosa. A los seis días posteriores a su ingreso, el paciente continuó con deterioro hemodinámico, desequilibrio electrolítico, shock séptico e insuficiencia suprarrenal que conllevó a su deceso a pesar de las medidas terapéuticas establecidas. Se intenta exponer el desafío que representa el diagnóstico de PCM sistémica y promover su sospecha clínica para poder identificar la enfermedad de forma oportuna y evitar complicaciones que conduzcan a un desenlace fulminante.

In silico identification of glycosylphosphatidylinositol-anchored proteins in Paracoccidioides spp.

Aim: To predict glycosylphosphatidylinositol (GPI)-anchored proteins in the genome of Paracoccidioides brasiliensis and Paracoccidioides lutzii. Materials & methods: Five different bioinformatics tools were used for predicting GPI-anchored proteins; we considered as GPI-anchored proteins those detected by at least two in silico analysis methods. We also performed the proteomic analysis of P. brasiliensis cell wall by mass spectrometry. Results: Hundred GPI-anchored proteins were predicted in P. brasiliensis and P. lutzii genomes. A series of 57 proteins were classified in functional categories and 43 conserved proteins were reported with unknown functions. Four proteins identified by in silico analyses were also identified in the cell wall proteome. Conclusion: The data obtained in this study are important resources for future research of GPI-anchored proteins in Paracoccidioides spp. to identify targets for new diagnostic tools, drugs and immunological tests.

Updates in Paracoccidioides Biology and Genetic Advances in Fungus Manipulation

The dimorphic fungi of the Paracoccidioides genus are the causative agents of paracoccidioidomycosis (PCM). This disease is endemic in Latin America and primarily affects workers in rural areas. PCM is considered a neglected disease, despite being a disabling disease that has a notable impact on the public health system. Paracoccidioides spp. are thermally dimorphic fungi that present infective mycelia at 25 °C and differentiate into pathogenic yeast forms at 37 °C. This transition involves a series of morphological, structural, and metabolic changes which are essential for their survival inside hosts. As a pathogen, the fungus is subjected to several varieties of stress conditions, including the host immune response, which involves the production of reactive nitrogen and oxygen species, thermal stress due to temperature changes during the transition, pH alterations within phagolysosomes, and hypoxia inside granulomas. Over the years, studies focusing on understanding the establishment and development of PCM have been conducted with several limitations due to the low effectiveness of strategies for the genetic manipulation of Paracoccidioides spp. This review describes the most relevant biological features of Paracoccidioides spp., including aspects of the phylogeny, ecology, stress response, infection, and evasion mechanisms of the fungus. We also discuss the genetic aspects and difficulties of fungal manipulation, and, finally, describe the advances in molecular biology that may be employed in molecular research on this fungus in the future.

In Vitro and In Vivo Effect of Peptides Derived from 14-3-3 Paracoccidioides spp. Protein

Background: Paracoccidioidomycosis (PCM) is a chronic disease that causes sequelae and requires prolonged treatment; therefore, new therapeutic approaches are necessary. In view of this, three peptides from Paracoccidioides brasiliensis 14-3-3 protein were selected based on its immunogenicity and therapeutic potential. Methods: The in vitro antifungal activity and cytotoxicity of the 14-3-3 peptides were evaluated. The influence of the peptides in immunological and survival aspects was evaluated in vivo, using Galleria mellonella and the expression of antimicrobial peptide genes in Caenorhabditis elegans. Results: None of the peptides were toxic to HaCaT (skin keratinocyte), MRC-5 (lung fibroblast), and A549 (pneumocyte) cell lines, and only P1 exhibited antifungal activity against Paracoccidioides spp. The peptides could induce an immune response in G. mellonella. Moreover, the peptides caused a delay in the death of Paracoccidioides spp. infected larvae. Regarding C. elegans, the three peptides were able to increase the expression of the antimicrobial peptides. These peptides had essential effects on different aspects of Paracoccidioides spp. infection showing potential for a therapeutic vaccine. Future studies using mammalian methods are necessary to validate our findings.