Соединения, для которых отсутствуют необходимые рецепторы на поверхности клеток, не способны проникать внутрь клеток. Для обеспечения их поступления в клетки используются различные методы (пермеабилизация, инъекция этих соединений внутрь клетки и т. д.). Однако эти способы дорогостоящие в применении, либо оказывают на клетки эффект, не совместимый с дальнейшей жизнедеятельностью. Вход в нагруженные флуоресцентными зондами хлортетрациклин (ХТЦ) и Фура-2АМ клетки гранулезы коров различных соединений вызывает изменение концентрации цитоплазматического и запасенного во внутриклеточных депо кальция. В интактных нагруженных ХТЦ клетках гранулезы добавление пролактина (ПРЛ) стимулировало освобождение Са2 из внутриклеточных депо. В необработанных клетках гепарин не способен самостоятельно проникать в клетки. Для обеспечения входа гепарина в клетки используется процедура пермеабилизации, то есть клетки предварительно обрабатываются детергентом (дигитонином). Использование гепарина приводило к ингибированию освобождения Са2 из внутриклеточных депо, стимулированного добавлением ПРЛ. Обработка клеток детергентом дигитонином не оказывала влияния на стимулированное ПРЛ освобождение Са2 из депо и ингибирующее действие гепарина на выход Са2 из внутриклеточных депо. В интактных нагруженных Фура-2АМ клетках гранулезы добавление ПРЛ не приводило к увеличению концентрации цитоплазматического кальция.После обработки дигитонином нагруженных Фура-2АМ клеток гранулезы внесение ПРЛ приводило к увеличению концентрации цитоплазматического Са2, которое ингибировалось при добавлении гепарина. Полученные данные позволяют предположить, что ХТЦ образует поры на поверхности клеток гранулезы, способствуя таким образом проникновению в клетки различных соединений.Соединения, для которых отсутствуют необходимые рецепторы на поверхности клеток, не способны проникать внутрь клеток. Для обеспечения их поступления в клетки используются различные методы (пермеабилизация, инъекция этих соединений внутрь клетки и т. д.). Однако эти способы дорогостоящие в применении, либо оказывают на клетки эффект, не совместимый с дальнейшей жизнедеятельностью. Вход в нагруженные флуоресцентными зондами хлортетрациклин (ХТЦ) и Фура-2АМ клетки гранулезы коров различных соединений вызывает изменение концентрации цитоплазматического и запасенного во внутриклеточных депо кальция. В интактных нагруженных ХТЦ клетках гранулезы добавление пролактина (ПРЛ) стимулировало освобождение Са2 из внутриклеточных депо. В необработанных клетках гепарин не способен самостоятельно проникать в клетки. Для обеспечения входа гепарина в клетки используется процедура пермеабилизации, то есть клетки предварительно обрабатываются детергентом (дигитонином). Использование гепарина приводило к ингибированию освобождения Са2 из внутриклеточных депо, стимулированного добавлением ПРЛ. Обработка клеток детергентом дигитонином не оказывала влияния на стимулированное ПРЛ освобождение Са2 из депо и ингибирующее действие гепарина на выход Са2 из внутриклеточных депо. В интактных нагруженных Фура-2АМ клетках гранулезы добавление ПРЛ не приводило к увеличению концентрации цитоплазматического кальция.После обработки дигитонином нагруженных Фура-2АМ клеток гранулезы внесение ПРЛ приводило к увеличению концентрации цитоплазматического Са2, которое ингибировалось при добавлении гепарина. Полученные данные позволяют предположить, что ХТЦ образует поры на поверхности клеток гранулезы, способствуя таким образом проникновению в клетки различных соединений.In the absence of the necessary receptors on the cell membrane surface, the compounds are not able to penetrate into the cells. Various methods are used to ensure the entry of such compounds into the cells (permeabilization, compound injection into the cell, etc.), however, all these methods are expensive to use or have a negative effect on the cellular viability. The penetration of various compounds into the granulosa cells of cows treated with chlortetracycline (CTC) and Fura-2AM fluorescent probes causes a change in the concentration of cytoplasmic calcium and calcium stored in intracellular stores. In intact CTC-treated granulosa cells, the addition of prolactin (PRL) stimulated the Ca2 release from the intracellular stores. In untreated cells, heparin is not able to independently penetrate into the cells. To ensure the penetration of heparin into the cells, the permeabilization procedure when the cells are pre-treated with a detergent (digitonin). The usage of heparin led to the inhibition of Ca2 release from the intracellular stores stimulated by the PRL. The treatment of the cells with digitonin did not affect the PRL-stimulated release of Ca2 and the inhibitory effect of heparin on the Ca2 release from the stores. In intact Fura-2AM-treated granulosa cells, the addition of PRL did not increase the concentration of cytoplasmic calcium. After digitonin treatment of Fura-2AM-treated granulosa cells, the supplementation of PRL led to an increase in the concentration of cytoplasmic Ca2, which was inhibited by the heparin addition. The obtained data suggest that CTC forms pores in the membrane of granulosa cells facilitating the penetration of various compounds into cells.
Determination of cell membrane surface charge density by second harmonic light scattering