Ранее нами было показано, что инкубация до замораживания сперматозоидов быков в присутствии соединений, увеличивающих количество капацитированных клеток [дибутирил циклический аденозинмонофосфат (dbcAMP), гепарин], после размораживания приводила к увеличению количества жизнеспособных клеток [2]. В данной работе исследовали влияние предварительной инкубации сперматозоидов быков до заморозки в присутствии соединений, увеличивающих количество акросома-реактивных клеток [пролактин (ПРЛ), гуанозинтрифосфат (ГТФ)], на жизнеспособность размороженных клеток. Если подготовленные подобным образом сперматозоиды использовать для искусственного оплодотворения, то в половых путях коров они попадут в среду, способствующую прохождению капацитации и будут там находиться в течение времени, достаточного для этого процесса. При повторной инкубации размороженных сперматозоидов активацию клеток проводили как в присутствии dbcAMP и IBMX (3-изобутил-1-метилксантин), так и ПРЛ и ГТФ. Повторная инкубация в течение 4 ч размороженных сперматозоидов быков, которые до замораживания обрабатывали совместным действием ПРЛ и ГТФ, приводила к увеличению количества жизнеспособных клеток как при добавлении dbcAMP и IBMX, так и ПРЛ и ГТФ. Определение с помощью хлортетрациклина местоположения флуоресценции в сперматозоидах показало, что повторная инкубация в течение 4 ч размороженных сперматозоидов не приводила к изменению соотношения числа клеток с различным функциональным статусом. Соотношение числа некапацитированных, капацитированных и акросома-реактивных клеток в интактных размороженных сперматозоидах и клетках, которые предварительно перед замораживанием обрабатывали ПРЛ и ГТФ, было одинаковым через 4 ч инкубации. Инкубация сперматозоидов быков до и после замораживания в присутствии индукторов акросомной реакции (ПРЛ и ГТФ) приводила к увеличению количества жизнеспособных клеток.It has been shown that the incubation of bovine spermatozoa before freezing in the presence of substances, which raise the number of capacitated cells [dibutyryl сyclic adenosine monophosphate (dbcAMP), heparin] after thawing led to the rise in number of viable cells [2]. In the present paper the effect of the preincubation of bull spermatozoa before freezing with substances increasing the number of acrosome-reactive cells (prolactin (PRL), guanosine triphosphate (GTP)) on their viability after thawing was examined. If spermatozoa, which are prepared by this way are used for artificial insemination, then in the reproductive tract of the cows they will fall into the environment which facilitates the passage of the capacitation and will remain there during sufficient time to undergo this process. With repeated incubation of thawed spermatozoa, the cell activation was performed both with dbcAMP and IBMX, and with PRL and GTP. The second 4 hours incubation of cells which were processed by PRL and GTP before freezing, led to the increase in the number of viable cells as with the addition of dbcAMP and IBMX, and PRL and GTP. The determination of fluorescence localization by chlortetracycline probe in sperm showed that the second incubation thawed spermatozoa for 4 hours did not lead to the change of the proportion of cells with different functional status. The ratio of uncapacitated, capacitated, and acrosome-reactive cells among intact thawed spermatozoa and cells which were previously treated by PRL and GTP before freezing was the same after 4 hours of the incubation. The preincubation of bovine spermatozoa before freezing with the acrosome reaction inductors (PRL and GTP) resulted to the increase in the number of viable cells.
The Modulation of Functional Status of Bovine Spermatozoa by Progesterone
