Abstract
Post-fixation with osmium tetroxide (OsO4), prior to examination by electron
microscopy, enables nematodes to be located in epoxy-resin blocks, and
improves contrast of ultrastructural features. For specimen visibility,
alternatives to OsO4 were examined as it can inhibit antigenicity, thus
preventing application of serological techniques. Basic fuchsin stain does
not affect antigenicity and when applied to trichodorids enabled specimens
to be readily located in the block, but had several disadvantages such as
causing substantial alteration of the nematode structure. Safranin-O stain
enabled Paratrichodorus anemones and P. pachydermus specimens to be located
in resin blocks, different parts of the nematode body to be distinguished,
and did not affect specimen ultrastructure. Also, with viruliferous
specimens it allowed immunogold labelling techniques to be applied for
identifying tobacco rattle virus particles at the site of retention in the
nematodes. Safranin-O is fluorescent and this feature was used to examine
sections from the spicula region of a male P. pachydermus specimen under a
confocal laser scanning microscope. La post-fixation au tétroxyde d’osmium
(OsO4) avant l’observation en microscopie électronique empêche la
localisation des nématodes dans les blocs de résine epoxy et augmente le
contraste des caractéristiques ultrastructurales. Pour la localisation des
spécimens, des solutions alternatives au OsO4, qui peut inhiber
l’antigénicité et donc empêcher l’application de techniques sérologiques,
ont été examinées. Le coloration à la fuschine basique n’affecte pas
l’antigénicité et permet de situer les spécimens dans les blocs, mais elle
présente de nombreux désavantages telle l’altération substantielle des
structures du nématode. La safranine-O permet la localisation de
Paratrichodorus anemones et de P. pachydermus, les différentes parties du
corps du nématode étant alors identifiables, et n’affecte en rien
l’ultrastructure du nématode. Chez les spécimens portant des virus, elle
permet également l’utilisation de techniques de marquage immunologique à
l’or pour identifier les particules du virus du tobacco rattle dans les
sites de rétention chez le nématode. La safranine-O est fluorescente et
cette particularité a été utilisée pour observer des sections de la région
des spicules chez un mâle de P. pachydermus en microscopie confocale à
balayage.