scholarly journals Evidencia de Leptospira spp. en musarañas Cryptotis mayensis. Nuevo hospedero en Yucatán, México.

2021 ◽  
Vol 32 (3) ◽  
pp. 161-165
Author(s):  
Alejandro Rafael Suárez-Galaz ◽  
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Silvia Hernández-Betancourt ◽  
Jesús Alonso Panti-May ◽  
Pablo Manrique-Saide ◽  
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Introducción. Las especies patógenas del género Leptospira ocasionan la leptospirosis en seres humanos y animales susceptibles. Los roedores son los reservorios naturales de las bacterias; otros animales silvestres son hospederos accidentales. Las musarañas han sido involucradas en el ciclo de transmisión de este patógeno en varios países; sin embargo, en México, no existe información al respecto. Objetivo. Describir la infección con Leptospira spp. en musarañas capturadas en Yucatán, México. Material y métodos. Se capturaron dos ejemplares de musaraña (Cryptotis mayensis) en el municipio de Hunucmá. Ambos fueron eutanasiados para recolectar fragmentos de riñón, bazo y músculo estriado esquelético que sirvieron en la extracción de ADN total. La infección con Leptospira se exploró por PCR convencional para la amplificación de un fragmento del gen 16S ribosomal (16S rRNA). Asimismo, para corroborar y robustecer los resultados, se realizaron otras reacciones para la amplificación de fragmentos correspondientes a los genes lipL32 y rpoC. Resultados. En la extracción de ADN correspondiente a tejido renal de un ejemplar se obtuvieron los amplificados de los genes 16S rRNA y rpoC. Conclusiones. Este trabajo representa el primer reporte de la infección con Leptospira en tejido renal de C. mayensis de Yucatán, México. Es necesario realizar más estudios en la región para determinar la participación de estos animales en el ciclo epidemiológico del género bacteriano.

2020 ◽  
Vol 14 (1) ◽  
pp. 17-26
Author(s):  
Gunawan Gunawan ◽  
Tri Wibawa ◽  
Mahardika Agus Wijayanti ◽  
Hayani Anastasia

Leptospirosis is still a global health problem because it affects human health in rural and urban areas, both in industrialized and developing countries. The aim of the study was to detect Leptospira spp. bacteria in kidney tissues isolated from rats in the Napu and Bada Highlands of Poso District, Central Sulawesi Province. Kidneys sample from 63 rats were collected from Napu and Bada Highlands of Poso District, Central Sulawesi Province in MayJune 2018. Polymerase Chain Reaction (PCR) was used to detect Leptospira. The molecular characterizations were conducted based on the 16SrRNA and LipL32 genes. Data were analyzed descriptively to describe the presence of pathogenic Leptospira DNA. Analysis phylogenetic was performed using MEGA 6.2 software. A total of 63 rats was successfullycaught during the study consisting of males and female for 36 (57.1%) and 27 (42.9%), respectively. The species of rats were R. exulans, R. tanezumi, R. argentiventer, R. norvegicus,  M. Musculus, Paruromys dominator, Maxomys sp., and Rattus sp. The pathogenic of Leptospira DNA was detected in rats with R. argentiventer and Paruromys dominatorspecies using the 16S rRNA and LipL32 gene. Sample sequences using LipL32 target gene is a close similarity with L. interrogans serovar Hardjo, serovar Autumnalis, Lai, Icterohaemorrhagiae, Balico, Grippotyphosa, Mini, Canicola, Hebdomadis; L. noguchii serovar Pomona and L. kirschneri whereas the sample sequence using 16S rRNA targetgene showed similarity with L. interrogans serovar Canicola, Copenhagen, Autumnalis, Pyrogenes, Javanica, Icterohaemorrhagiae, Manilae, Bratislava, Linhae, Hebdomadis, and L. kirschneri serovar Grippotyphosa. The PCR method with the target gene 16SrRNA and LipL32 are able to detect Leptospira spp. in rats R. argentiventer and P. dominator species Keywords: Leptospira, 16S rRNA, LipL32, PCR, Kidney’s Rat   Leptospirosis masih merupakan masalah kesehatan global karena mempengaruhikesehatan manusia di daerah pedesaan dan perkotaan, baik di negara industri maupun mnegara berkembang. Tujuan penelitian adalah untuk mendeteksi bakteri Leptospira spp di jaringan ginjal dari tikus di Dataran Tingi Napu dan Bada Kabupaten Poso, Provinsi Sulawesi Tengah. Ginjal tikus sebanyak 63 sampel dikoleksi dari Dataran Tinggi Napu dan Bada Kabupaten Poso, Provinsi Sulawesi Tengah pada bulan Mei – Juni 2018. PCR digunakan untuk mendeteksi Leptospira. Karakterisasi molekuler dilakukan berdasarkan gen 16SrRNA dan LipL32. Data dianalisis secara deskriptif untuk menggambarkan keberadaaN Leptospira yang patogenik. Analisis filogenetik dilakukan dengan menggunakan perangkat lunak Mega 6.2. Sebanyak 63 tikus berhasil ditangkap selama penelitian yang terdiri dari jantan dan betina, masing masing 36 ekor (75,1%) dan 27 ekor (42,9%). Spesies tikus adalah R. exulans, R. tanezumi, R. argentiventer, R. norvegicus, M. Musculus, Paruromys dominator, Maxomys sp, dan Rattus sp. DNA Leptospira patogenik terdeteksi pada tikus dengan spesies R. argentiventer dan Paruromys dominator menggunakan gen 16SrRNA dan LipL32 Sekuen sampel dengan target gen LipL32 menunjukkan kesamaan dengan L. interrogans serovar Hardjo, serovar Autumnalis, Lai, Icterohaemorrhagiae, Balico, Grippotyphosa, Mini, Canicola, Hebdomadis; L. noguchii serovar Pomona dan L. kirschneri. Sedangkan sekuen sampel dengan target gen 16S rRNA menunjukkan kesamaan dengan L. interrogans serovar Canicola,Copenhagen, Autumnalis, Pyrogenes, Javanica, Icterohaemorrhagiae, Manilae, Bratislava, Linhae, Hebdomadis, dan L. kirschneri serovar Grippotyphosa. Metode PCR dengan target gen 16SrRNA dan LipL32 mampu mendeteksi Leptospira spp. pada tikus dengan spesies R. argentiventer dan P. dominator. Kata kunci: Leptospira,  16S rRNA, LipL32,  PCR,  Ginjal Tikus


Author(s):  
Yu. V. Ostankova ◽  
A. V. Semenov ◽  
N. A. Stoyanova ◽  
N. K. Tokarevich ◽  
N. E. Lyubimova ◽  
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Aim. Comparative typing of Leptospira spp. strain collection based on analysis of 16S RNA fragment. Materials and methods. 2 pairs of primers were used for PCR, that jointly flank 1423 b.p. sized fragment. Sequences of Leptospira spp. strain 16S rRNA, presented in the international database, were used for phylogenetic analysis. Results. A high similarity, including interspecies, of the 16S fragment in Leptospira spp. strains was shown independently of the source, serovar and serogroup. Heterogeneity ofthe primary matrix, spontaneous mutations of hotspots and erroneous nucleotide couplings, characteristic for 16S sequence of pathogenic Leptospira spp. strains, are discussed. Molecular-genetic characteristic of certain reference Leptospira spp. strains by 16S sequence is obtained. Conclusion. Results of the studies give evidence on expedience of introduction into clinical practice of identification of Leptospira spp. by 16S sequence directly from the clinical material, that would allow to significantly reduce identification time, dismiss complex type-specific sera and other labor-intensive methods.


2019 ◽  
Vol 11 (1) ◽  
Author(s):  
Lillia Vasiunets ◽  
Oksana Semenyshyn ◽  
Oksana Velychko ◽  
Lesja Hatsiy ◽  
Iryna Kulish

ObjectiveTo estimate effectiveness of PCR method for epidemiology surveillance for leptospirosis in Lviv Oblast and compare it with microscopic agglutination test (MAT).IntroductionLeptospirosis is one of the most important zoonotic diseases based on the severity of the clinical course, frequency of fatal outcome and long-term clinical consequences. In Ukraine, leptospirosis is one of the most widespread natural-focal infectious diseases. Based on data of the Public Health Center of the Ministry of Health of Ukraine in 2017, the incidence rate was 0.77 per 100,000 population (330 cases), mortality rate was 0,08 per 100 000 population (case fatality rate was 10,9 %). In Lviv Oblast, the disease was registered as sporadic cases that were not related to each other (in 2017, the incidence rate was 0.72 per 100,000 population [1]. Laboratory testing of samples collected from patients and environmental objects that may be the source of the pathogen is an integral part of the epidemiological surveillance of leptospirosis. Modern laboratory diagnostics of leptospirosis is based on microbiological, immunological and molecular-biological methods used in various combinations [2, 3]. Molecular genetic diagnostic methods that allow detection of the Leptospira spp. RNA/DNA are the most promising for diagnosis of leptospirosis in the early stages of the disease. Investigation of environmental objects allows timely detection of the pathogen in natural foci and conducting a set of anti-epidemic necessary measures.MethodsWe used the following PCR kits “Leptospira pathogenic-Real time (FR001) Genecam Biotechnology AG” and “LPS PCR kit variant FRT-50F “Amplisens” for leptospira DNA detection. “Ultra Clean Blood Spin DNA isolation kit MO BIO Laboratories, Inc.” and a set of reagents from the clinical materials “RIBO-prep” for the isolation of RNA / DNA loci of Leptospira spp. were used.In parallel, 37 human and 27 rodent serum samples were studied using MAT.PCR and MAT positive gray rats samples were additionally studied using the bacteriology method (adrenal cortex seeded on the liquid media).Epidemiological investigation (namely, patient interviewing, investigation of places where the infection was acquired, exploring the living conditions) and outbreak investigation report writing were conducted for all recorded cases (41).ResultsResults of the human samples investigation. During 2016-2017 and 7 months of 2018, 41 cases of leptospirosis were registered in Lviv Oblast. All these cases were confirmed with laboratory methods, including PCR; DNA of Leptospira spp. was detected in 15 patients (36,6 %), and MAT was positive in 26 cases (63,4%). In 8 patients (19,5%) both PCR and MAT testing gave positive results. Over the past three years, 5 fatal cases of leptospirosis (12.1%) have been registered, including two patients who died during the first week of the disease. For those two patients, the diagnosis was confirmed by PCR and MAT (leptospira lysis in MAT was noticed in the titre of 1:100-1:200); for other two patients, the diagnosis was confirmed using MAT only (1:800); and in the last patient from this group, leptospira lysis was noticed in low titres in MAT.Results of epidemiological investigation revealed that the most patients were infected through contact way of transmission (78.1%), including contact with objects and food contaminated with rodent excrement, and water-borne transmission (19.5%) during bathing, fishing, hunting, field work; in other 2.4% of cases the way of transmission was not identified.Epidemiological history showed that the main source of infection for humans in natural and urban foci were grey rats and rodents that could adapt to transforming ecosystems conditions.Results of animal samples investigation. Among 27 samples of gray rats, caught in places where patients probably got infected, in 11 samples (40.7%) a specific 16S rRNA of Leptospira spp. was detected and also MAT was positive; 1 samples (3,7 %) from this group was seropositive in MAT only.L. icterohaemorrhagiae live culture was isolated from 3 samples of grey rats that were positive in PCR and MAT.Results of environmental samples investigation showed the following: among 89 of water samples collected from recreation areas (lakes), 4 samples (4.5%) were positive (16S rRNA of Leptospira spp.). PCR of 8 samples of drinking water collected from leptospirosis foci gave negative results.ConclusionsIn Lviv Oblast, Ukraine, the potential of laboratory diagnostics of leptospirosis has increased due to introduction of PCR method in diagnostic algorithm. Results of clinical materials investigations revealed that with PCR it is became possible to confirm the diagnosis within the first several days from the onset of the disease (in 15 patients). Diagnosis was confirmed using MAT in 26 patients starting from the second week of the disease. At the same time, MAT is crucial, since it enables to identify the etiological structure of the disease and monitor the dynamics of the immune response.Investigation of animal and environmental samples with MAT and PCR methods allowed to establish causal relationships of patients with possible sources of infection.PCR method allowed to conduct epidemiological surveillance for leptospirosis at a new level, as the time for receiving results compare to the classical methods as well as biological risks during work with biomaterials have decreased.Currently, the combination of PCR and MAT methods for laboratory research in the surveillance of leptospirosis is optimal.Understanding environmental and epidemiological determinants allows for the identification of appropriate public health approaches to improve the situation with leptospirosis, such as reducing populations of pathogen reservoirs (rats) by conducting deratization measures, vaccinations of dogs and livestock, and regulatory compliance.References1. About the epidemiological situation with leptospirosis in Ukraine in 2017 and measures to prevent it / Information letter of PHC of the Ministry of Health of Ukraine , 20.07.2018 # 2651. – Kyiv. – 2018. – 26 p.2. Leptospirosis diagnosis: competancy of various laboratory tests / Suman Veerappa Budihal et all. / Journal of Clinical and Diagnostic Research. - 2014, Vol-8(1). – P. 199-202.3. World Health Organization. Human leptospirosis : guidance for diagnosis, surveillance and control. – 2003. – 122 p. ISBN 92 4 154589 5.


Biomédica ◽  
2018 ◽  
Vol 38 ◽  
pp. 51-58 ◽  
Author(s):  
Marco Torres-Castro ◽  
Bayron Cruz-Camargo ◽  
Rodrigo Medina-Pinto ◽  
Bibiana Reyes-Hernández ◽  
Carlos Moguel-Lehmer ◽  
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Introducción. La leptospirosis es una enfermedad zoonótica endémica en México, ocasionada por la bacteria del género Leptospira, la cual constituye un problema de salud pública y veterinaria. Los roedores son los reservorios más relevantes de Leptospira spp., debido a que la bacteria se establece y se reproduce en su tejido renal y es excretada por la orina.Objetivo. Identificar la presencia de Leptospira spp. en tejido renal de roedores capturados en Yucatán, México.Materiales y métodos. Se capturaron roedores sinantrópicos y silvestres en el municipio rural de Cenotillo, Yucatán, México. Se tomó un riñón de cada roedor y se extrajo el ADN total. La identificación de Leptospira spp. se hizo mediante la detección de dos fragmentos del gen 16S rRNA con una reacción en cadena de la polimerasa (PCR) de punto final. Los productos positivos se secuenciaron y se analizaron con herramientas de alineamiento.Resultados. Se capturaron 92 roedores pertenecientes a siete especies distintas. La PCR arrojó 5,4 % (5/92) de positividad global. El análisis del alineamiento de los aislamientos de los roedores infectados demostró 100 % de cobertura e identidad con la especie Leptospira interrogans. Esta es la primera evidencia molecular de la circulación de Leptospira spp. en Heteromys gaumeri capturados en Yucatán, México.Conclusión. Se evidenció que los roedores de Yucatán, México, son reservorios de Leptospira spp. y participan en el ciclo de infección de la leptospirosis en la región.


2016 ◽  
Vol 34 (1) ◽  
pp. 23
Author(s):  
Jorge Sequeira Soto ◽  
María De los Ángeles Valverde Jiménez ◽  
Luis Nazario Araya Sánchez ◽  
José Alfredo Sequeira Avalos ◽  
Manrique Oviedo

Se realizó un estudio transversal, en la región Huetar Norte de Costa Rica, para determinar la seropositividad a Leptospira spp en ganado bovino lechero (2010-2012). Esta región presenta alta incidencia de la infección en humanos.  Es la de mayor producción lechera en el país. Se procesó 2375 muestras de suero por la técnica del microaglutinación (MAT), correspondientes a 36 fincas lecheras asociadas a la Cooperativa de Productores de Leche Dos Pinos. La seroprevalencia global detectada, al considerar como positivos aquellos títulos mayores a 1:160, fue de 9.13%, observándose títulos de hasta 1:5120 en animales clínicamente sanos. El comportamiento, entre fincas, fue heterogéneo, detectándose porcentajes de positividad entre 0-25% en los animales analizados. Los serogrupos, más frecuentemente identificados, correspondieron a Pomona (15.7%), Tarassovi (16.6%) y Hebdomadis (25.8%). Se detectó una asociación, estadísticamente significativa (p<0.05) con serogrupos asociados a algunas de las fincas muestreadas. De igual manera, las fuentes de agua utilizadas por las fincas presentaron asociación estadística (p< 0.05) con la positividad hacia Leptospira spp. Esta asociación no se identificó para la edad o la raza del animal (p>0.05).


2007 ◽  
Vol 23 (9) ◽  
pp. 2094-2102 ◽  
Author(s):  
Piedad Agudelo-Flórez ◽  
Berta Nelly Restrepo-Jaramillo ◽  
Margarita Arboleda-Naranjo

Leptospirosis es una zoonosis de gran incidencia en regiones tropicales. Su prevalencia es desconocida en la región del Urabá colombiano. Entre marzo y octubre del año 2000 se realizó un estudio descriptivo de corte para determinar la seroprevalencia de anticuerpos contra Leptospira spp. y describir algunos factores de riesgo en nueve municipios del Urabá. La población incluida fue de 582 personas a las cuales se les tomó una muestra de sangre y se le aplicó una encuesta sobre factores de riesgo. La detección de anticuerpos contra Leptospira spp. fue realizada por inmunofluorescencia indirecta y por microaglutinación. La seroprevalencia general en la zona fue 12,5% (IC95%: 10,01-15,5). No hubo diferencias en cuanto al sexo, raza, oficio, edad, años de residencia en la zona y características de la vivienda. L. interrogans serovar Grippotyphosa fue la especie más prevalente, identificándose en 53 de los seropositivos. En 38 seropositivos los títulos detectados fueron iguales o mayores a 1:400. En conclusión, existe alta prevalencia de anticuerpos contra Leptospira spp. Es necesario orientar las medidas de control para disminuir el riesgo de exposición ambiental a leptospirosis por parte de los habitantes de la zona.


2012 ◽  
Vol 32 (7) ◽  
pp. 633-639 ◽  
Author(s):  
Denise Chiareli ◽  
Maria R.V. Cosate ◽  
Elvio C. Moreira ◽  
Rômulo C. Leite ◽  
Francisco C.F. Lobato ◽  
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Um surto de leptospirose foi observado em bovinos leiteiros em Santo Antônio do Monte, Minas Gerais. O rebanho apresentava reações positivas anti-leptospira sorovar Hardjo no teste de microaglutinação (MAT) e havia sido vacinado anteriormente com vacina experimental contendo a sorovariedade Hardjo. O MAT revelou 48,06% dos bovinos positivos para sorovariedade Hardjo genótipo Hardjobovis, 36,82% para sorovariedade Hardjo genótipo Hardjoprajitno. Os animais apresentavam aborto e mastite com presença de sangue no leite. A presente pesquisa teve como objetivos isolar as sorovariedades existentes a partir da urina de vacas sorologicamente positivas, elaborar uma vacina experimental com as sorovariedades isoladas no rebanho, avaliar a eficiência do programa de vacinação por um período de dois anos por meio da sorologia do rebanho. Foi isolada Leptospira spp. a partir da urina de duas vacas com sinais sugestivos da doença. As amostras isoladas foram identificadas pela sorologia com anticorpos monoclonais e seqüenciamento do gene 16S rRNA como pertencentes à espécie Leptospira interrogans, sorogrupo Sejroe, sorovariedade Hardjo e genótipo Hardjoprajitno. O uso da vacina autógena foi eficaz no controle da leptospirose no rebanho no período de dois anos. Os resultados da sorologia revelaram ausência de animais positivos na última prova realizada no rebanho.


2012 ◽  
Vol 12 (1) ◽  
pp. 185 ◽  
Author(s):  
Anna Rettinger ◽  
Inke Krupka ◽  
Karola Grünwald ◽  
Viktor Dyachenko ◽  
Volker Fingerle ◽  
...  

2020 ◽  
Vol 11 (4) ◽  
pp. 946-960
Author(s):  
Rosa Elena Miranda Morales ◽  
Veronica Rojas Trejo ◽  
Luis Enrique López-Cerino ◽  
Erika Margarita Carrillo Casas ◽  
Rosa Elena Sarmiento Silva ◽  
...  

M. hyopneumoniae, M. hyorhinis y M. hyopsynoviae son especies genéticamente relacionadas del género Mycoplasma que afectan la producción porcina. El objetivo de este trabajo fue el aislamiento e identificación por PCR de M. hyopneumoniae, M. hyorhinis y M. hyosynoviae a partir de hisopos nasales y muestras de pulmón de cerdos de diferentes regiones mexicanas para determinar la frecuencia de estas especies y evaluar la PCR como herramienta diagnóstica para NEP. Se incluyeron cerdos de 4 a 8 semanas con diagnóstico clínico de NEP. Se obtuvieron muestras de pulmón e hisopos nasales para el aislamiento de Mycoplasma en medio Friis líquido y se identificaron mediante la PCR especie-específica basada en la subunidad 16S rRNA. El aislamiento se logró en 37.11 % (36/97) muestras. Las tres especies de Mycoplasma se identificaron en muestras de pulmón e hisopos nasales. La co-infección por Mycoplasma se identificó en el 27.77 % (10/36). Los géneros bacterianos asociados a las infecciones por Mycoplasma fueron E. coli, Bordetella, Enterobacter, SCN, Corynebacterium, Pasteurella, Streptococcus, Shigella y Kebsiella. La infección mixta estuvo presente en 26 hisopos nasales (45.61 %) y ausente en pulmones. Se concluyó que la frecuencia de Mycoplasma en las fincas de producción fue mayor a la esperada (40.27 %). También se identificaron otras especies de Mycoplasma involucradas en el desarrollo de la NEP. Por lo tanto, la vigilancia asistida por el aislamiento y las técnicas moleculares pueden ser de gran ayuda para la eliminación de Mycoplasma de las explotaciones porcinas y para los proveedores de pie de cría.


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