Opuntia ficus-indica é uma cactácea utilizada na produção de bioprodutos, sendo rica em carboidratos e reconhecida como fonte alternativa de alimento para agricultura de subsistência. Este trabalho objetivou avaliar a utilização do extrato líquido de O. ficus-indica como substrato para o crescimento de leveduras de interesse biotecnológico. Candida utilis, C. lipolytica, Saccharomyces cerevisiae e Kluyveromyces marxianus foram cultivadas no extrato obtido após tratamento da cactácea. Alíquotas do cultivo microbiano foram coletadas para análise de biomassa, açúcares redutores, pH e parâmetros cinéticos. K. marxianus apresentou maior taxa de crescimento (µmax= 0,25h-1) e maior porcentagem de consumo de açúcar (95,68%). C. utilis obteve melhor rendimento de biomassa em relação ao substrato consumido (Yx/s=2,69). C. lipolytica se destacou por exibir melhor perfil cinético uma vez que apresentou maiores valores de produção de biomassa (∆Xmax=10,93 g/L) e produtividade (P= 0,58 g/L.h-1) em 24 horas de cultivo. A influência de diferentes concentrações salinas no crescimento de C. lipolytica cultivada em extrato de O. ficus-indica foi testada com NaCl e KCl (0,1M, 0,25M, 0,50M, 1M, 2M e 4M). No crescimento sob estresse a levedura foi tolerante às concentrações salinas (até 1M de NaCl e a 0,5M para KCl). As concentrações maiores inibiram o crescimento celular. A concentração de 4M foi considerada letal para ambas as células leveduriformes e a 2M sub-letal. As células de C. lipolytica expressaram adaptação contra estresse osmótico até a concentração de 1M. Os resultados sugerem a utilização desta cactácea como substrato alternativo para a produção de biomassa microbiana.