scholarly journals Proteinograma e teores de cobre, ferro e zinco no soro sanguíneo de ovelhas da raça Santa Inês com mastite experimental por Staphylococcus aureus

2010 ◽  
Vol 30 (5) ◽  
pp. 435-442 ◽  
Author(s):  
Nivaldo de Azevêdo Costa ◽  
Luis Carlos Valeriano Simão ◽  
Rogério Adriano dos Santos ◽  
José Augusto Bastos Afonso ◽  
José Jurandir Fagliari ◽  
...  
Keyword(s):  
Staphylococcus Aureus ◽  
Sds Page ◽  
Santa Inês

Este estudo teve por objetivo avaliar o proteinograma e os teores de cobre, ferro e zinco no soro sangüíneo de ovelhas com mastite induzida por cepa de campo de Staphylococcus aureus. Foram utilizadas 10 ovelhas da raça Santa Inês, primíparas, recém-paridas, com aproximadamente dois anos de idade e bom estado nutricional. Inoculou-se na metade direita da glândula mamária 1,0x10(4) UFC/mL da bactéria, enquanto que a metade esquerda serviu como controle. Os animais foram acompanhados diariamente e a partir do diagnóstico clínico de mastite, procedeu-se colheita do material para realização do proteinograma sérico em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE) e para determinação do teor plasmático de fibrinogênio e das concentrações séricas de cobre, ferro e zinco em 16 momentos a saber: antes da inoculação (controle) e 12h, 24h, 36h, 48h, 60h, 72h, 84h, 96h, 108h, 120h, 132h, 168h, 180h, 288h e 336h após a inoculação (p.i.). Todas as ovelhas apresentaram quadro clínico de mastite, com perda da funcionalidade da glândula mamária. O proteinograma permitiu a identificação de 23 proteínas, cujos pesos moleculares (PM) variaram de 26.000 a 185.000 dáltons (Da), incluindo proteínas de fase aguda, IgG e IgA. Notou-se aumento significativo nas concentrações de haptoglobina e ceruloplasmina, assim como de IgG e IgA. Não se constatou alteração nos teores de antitripisina e de glicoproteína ácida .Verificou-se diminuição nos teores de ferro e zinco e elevação na concentração de cobre. Constatou-se correlação positiva entre o teor plasmático de fibrinogênio e as concentrações séricas de ceruloplasmina (r=0,74), a haptoglobina (r=0,62) e IgA(r=0,62). Estes resultados mostram a importância das proteínas de fase aguda ceruloplasmina e haptoglobina como indicadores auxiliares da infecção intramamária de ovelhas, assim como ratifica a relevância do fibrinogênio como marcador inflamatório em razão de sua alta correlação com as proteínas especificas. As alterações nas concentrações séricas de Cu, Fe e Zn sugerem a ação de mediadores inflamatórios, estimulados por S. aureus.

scholarly journals Perfil eletroforético do colostro de ovelhas suplementadas com propileno glicol e cobalto associado à vitamina B12 no final da gestação

2016 ◽  
Vol 36 (suppl 1) ◽  
pp. 95-100 ◽  
Author(s):  
Anne Grace S.S. Campos ◽  
Rogério A. dos Santos ◽  
José Augusto B. Afonso ◽  
Pierre C. Soares ◽  
José J. Fagliari ◽  
...  
Keyword(s):  
Sds Page ◽  
Santa Inês

Resumo: Este trabalho teve por objetivo avaliar o proteinograma do colostro de ovelhas submetidas a administração de propileno glicol e de cobalto associado à vitamina B12 no final da gestação. Dezoito ovelhas da raça Santa Inês, prenhas e com idade variando entre 18 meses a cinco anos foram distribuídas, por amostragem probabilística em três grupos experimentais, aproximadamente 30 dias antes da data prevista para o parto. No Grupo 1 (G1/n=6) foram administrados 30mL de propileno glicol P.A. via oral diariamente; no Grupo 2 (G2/n=6) foi administrado 1mg de cloreto de cobalto em solução a 1% via oral diariamente e 2mg de vitamina B12, via intramuscular semanalmente e no Grupo 3 (G3/n=6): grupo controle. Logo após o parto procedeu-se a colheita de 30mL de colostro, que foram acondicionados em recipientes apropriados e encaminhados ao laboratório. Após homogeneização, adicionou-se a cada 1.000μL de colostro, 75μL de solução de renina, que foi mantido em banho-maria a 37ºC por aproximadamente 20 minutos e centrifugado a 21.000G durante dez minutos em centrífuga refrigerada. Posteriormente, a fração intermediária, correspondente ao soro do colostro, foi aliquotada e mantida em ultrafreezer a -80oC para posterior determinação das proteínas. A determinação da proteína total do soro colostral foi realizada empregando-se reagente comercial. A separação das proteínas foi realizada utilizando-se a técnica de eletroforese em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE). Foram identificadas as proteínas IgA, lactoferrina, albumina, IgG de cadeia pesada (IgGCP), β-caseína, IgG de cadeia leve (IgGCL), β-lactoglobulina and α-lactoalbumina, não havendo influência da administração dos suplementos na fase final da gestação sobre as concentrações protéicas do colostro.

Bacteriocin ST91KM, produced by Streptococcus gallolyticus subsp. macedonicus ST91KM, is a narrow-spectrum peptide active against bacteria associated with mastitis in dairy cattle

2008 ◽  
Vol 54 (7) ◽  
pp. 525-531 ◽  
Author(s):  
Reneé Pieterse ◽  
Svetoslav D. Todorov ◽  
Leon M.T. Dicks
Keyword(s):  
Staphylococcus Aureus ◽  
Antimicrobial Activity ◽  
Streptococcus Agalactiae ◽  
Staphylococcus Epidermidis ◽  
Mode Of Action ◽  
Proteolytic Enzymes ◽  
Streptococcus Dysgalactiae ◽  
Streptococcus Gallolyticus ◽  
Streptococcus Uberis ◽  
Sds Page

Streptococcus gallolyticus subsp. macedonicus ST91KM produces a bacteriocin (macedocin ST91KM) active against Streptococcus agalactiae , Streptococcus dysgalactiae subsp. dysgalactiae , Streptococcus uberis , Staphylococcus aureus , and Staphylococcus epidermidis . Macedocin ST91KM is, according to tricine-SDS PAGE, between 2.0 and 2.5 kDa in size. Antimicrobial activity remained unchanged after 2 h of incubation at pH 2.0–10.0 and after 100 min at 100 °C. The peptide was inactivated after 20 min at 121 °C and when treated with proteolytic enzymes. Treatment with α-amylase had no effect on activity, suggesting that the mode of action does not depend on glycosylation. Amplification of the genome of strain ST91KM with primers designed from the macedocin precursor gene (mcdA) produced 2 fragments (approximately 375 and 220 bp) instead of one 150-bp fragment, as recorded for macedocin produced by Streptococcus gallolyticus subsp. macedonicus ACA-DC 198. Strain ACA-DC 198 was not available. However, DNA amplified from strain LMG 18488 (ACA-DC 206), genetically closely related to strain ACA-DC 198, revealed 99% homology to the mcdA of strain ACA-DC 198 (accession No. DQ835394). Macedocin ST91KM may thus be a second putative bacteriocin described for Streptococcus gallolyticus subsp. macedonicus.

scholarly journals POTENSI BAKTERI ASAM LAKTAT DALAM MENGHASILKAN BAKTERIOSIN SEBAGAI ANTIMIKROBA DAN PENGUKURAN BERAT MOLEKULNYA DENGAN SDS-PAGE DARI ISOLAT FERMENTASI KAKAO

2015 ◽  
Vol 1 (2) ◽  
pp. 126
Author(s):  
Urnemi ◽  
Sumaryati Syukur ◽  
Endang Purwati ◽  
Sanusi Ibrahim ◽  
Jamsari
Keyword(s):  
Staphylococcus Aureus ◽  
Antimicrobial Activity ◽  
Bacillus Subtilis ◽  
Lactic Acid ◽  
Lactic Acid Bacteria ◽  
Pathogenic Bacteria ◽  
Inhibition Zone ◽  
Sds Page ◽  
Inhibition Zones ◽  
And Staphylococcus Aureus

ABSTRACT Lactic acid bacteria (LAB) were isolated from of cocoa beans fermentation Forestero variety from West Sumatera, that were eleven isolates. The isolates were tested to antimicrobial activity against pathogenic bacteria E.coli NBRC 14237, Staphylococcus aureus NBRC 13276, Bacillus subtilis BTCCB 612, listeria m. dan S. Typhii. Results the research showed that, isolates had inhibition zone to pathogenic bacteria, that were 7 mm till 12 mm at 48 hours observation. R2.4 isolate was most potential to inhibition zones growth pathogenic bacteria, that was 11mm till 12 mm to five pathogens. R2.4 isolates was the highest to against pathogenic bacteria (Bacillus subtilis BTCCB, Listeria monocytogenesis and Staphylococcus aureus NBRC) had inhibition zones, that was 12.00 mm till 48 hours. Listeria monocytogenesis had been known as pest bacterium of food born, so that R2.4 isolate can be used as food biopreservative. Crude of R2.4 isolate molecular weight was 10 kDa by SDS-PAGE.  Key words: Lactic acid bacteria, Antimicrobial activity, SDS-PAGE, Cocoa fermentation and food biopreservative                                                      

scholarly journals EVALUACIÓN BIOQUÍMICA Y BACTERICIDA DEL VENENO DE CROTALUS DURISSUS (DEPARTAMENTO DEL TOLIMA)

2020 ◽  
Vol 11 (1) ◽  
Author(s):  
Walter Murillo Arango
Keyword(s):  
Escherichia Coli ◽  
Staphylococcus Aureus ◽  
E Coli ◽  
Sds Page ◽  
Crotalus Durissus

En el departamento del Tolima no hay estudios que permitan precisar con certeza la magnitud del accidente ofídico causado por Crotalus durissus; Por lo anterior existe la necesidad de generar información toxicológica, así como conocimiento del posible potencial antimicrobiano de moléculas como proteínas y péptidos que componen el veneno. En este trabajo se analizó el perfil electroforético por SDS-PAGE del veneno crudo extraído de individuos colectados en el municipio de Natagaima (Tolima) y la asociación de sus componentes con la actividad hemolítica directa e indirecta sobre agar sangre y su actividad bactericida. Se evaluó el potencial del veneno crudo contra Escherichia coli, Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeuroginosa. El veneno mostró bandas de peso molecular 26.6 kDa., 17, 14.2, 6.5, 3.5 y 1.06 kDa., correspondientes para reportes del veneno de esta especie. La actividad hemolítica directa e indirecta fueron dosis dependiente, siendo la dosis hemolítica mínima de 200 mg/ml. El efecto bactericida del veneno crudo fue diferencial sobre los microorganismos evaluados, presentando actividad moderada sobre E. coli. Los resultados constituyen datos valiosos para reconocer preliminarmente el potencial antimicrobiano del veneno de Crotalus durissus (cascabel) de la zona de Natagaima-Tolima.

scholarly journals New Exfoliative Toxin Produced by a Plasmid-Carrying Strain of Staphylococcus hyicus

1999 ◽  
Vol 67 (8) ◽  
pp. 4014-4018 ◽  
Author(s):  
Hisaaki Sato ◽  
Takao Watanabe ◽  
Yasuko Murata ◽  
Ayumi Ohtake ◽  
Mayumi Nakamura ◽  
...  
Keyword(s):  
Molecular Weight ◽  
Staphylococcus Aureus ◽  
Gel Electrophoresis ◽  
Polyacrylamide Gel Electrophoresis ◽  
Sodium Dodecyl ◽  
Gel Filtration ◽  
The Other ◽  
Exfoliative Toxin ◽  
Sds Page ◽  
Serotype B

ABSTRACT A new serotype of Staphylococcus hyicus exfoliative toxin (SHET), serotype B, was isolated from the culture filtrate of a plasmid-carrying strain of S. hyicus. The new SHET was purified by precipitation with 70% saturated ammonium sulfate, gel filtration on a Sephadex G-75 column, column chromatography on DEAE–Cellulofine A-500, and sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). The new SHET caused exfoliation of the epidermis as determined by the so-called Nikolsky sign when inoculated into 1-day-old chickens. The new SHET was serologically different fromStaphylococcus aureus exfoliative toxins (ETs) (ETA, ETB, and ETC) and from the SHET from the plasmidless strain but showed the same molecular weight as the other serotypes of toxins on SDS-PAGE. It was thermolabile and lost its toxicity after being heated at 60°C for 30 min. We propose that the new SHET be designated SHETB and that the SHET produced by the plasmidless strain be designated SHETA.

scholarly journals Physical evaluation, morphological and identification of seminal proteins in Santa Ines sheep

2017 ◽  
Vol 18 (1) ◽  
pp. 211-220
Author(s):  
Marilza Assunção de OLIVEIRA ◽  
Roseane Pinto Martins de OLIVEIRA ◽  
Ana Rita de LIMA ◽  
Edmar Vaz de ANDRADE ◽  
Jan Sidarta Lima de ABREU ◽  
...  
Keyword(s):  
Mass Spectrometry ◽  
Molecular Markers ◽  
Seminal Plasma ◽  
Two Dimensional ◽  
Two Dimensional Electrophoresis ◽  
Physiological Processes ◽  
Zeta Chain ◽  
Sds Page ◽  
Santa Inês ◽  
Dimensional Electrophoresis

SUMMARY This study aimed to identify proteins in the seminal plasma associated with fertility in sheep of Santa Inês in Manaus, AM, using twodimensional electrophoresis techniques associated with mass spectrometry. Semen samples from eight adult sheep were collected by removing an aliquot for the physical and morphological assessments of semen and seminal plasma was subjected to SDS-PAGE profile and two-dimensional electrophoresis. Gels were stained with colloidal Coomassie, scanned and analyzed using ImageMaster 2D Platinum software, version 6.0. The selected individual spots were cut from the master gel, digested with trypsin and subjected to identification by mass spectrometry (MALDITof / Tof). Of the 108 spots detected in the gel, it selected 10 differential spots (based on the distribution thereof in the bidimensional gel and pre-analysis of the 2D ImageMaster Platinum Software) identifying 03 proteins: clusterin, a protein 14-3-3 zeta chain and Ram Seminal versicles 22kDa Protein. The identity of these proteins implies that the components of seminal plasma participate in physiological processes involved in sperm protection, motility and sperm capacitation, all associated with fertility. These proteins need to be better studied to see whether the same could be used as molecular markers of fertility as they were also found in other studies conducted with sheep Santa Ines.

scholarly journals The Role of Subinhibitory Concentrations of Daptomycin and Tigecycline in Modulating Virulence in Staphylococcus aureus

Antibiotics ◽  
2021 ◽  
Vol 10 (1) ◽  
pp. 39
Author(s):  
Salman Sahab Atshan ◽  
Rukman Awang Hamat ◽  
Marco J. L. Coolen ◽  
Gary Dykes ◽  
Zamberi Sekawi ◽  
...  
Keyword(s):  
Gene Expression ◽  
Staphylococcus Aureus ◽  
Polyacrylamide Gel Electrophoresis ◽  
Sodium Dodecyl ◽  
Extracellular Proteins ◽  
Clinical Isolates ◽  
Sds Page ◽  
Strain Type ◽  
2D Gel ◽  
Culture Supernatants

Staphylococcus aureus (S. aureus) infections are notoriously complicated by the ability of the organism to grow in biofilms and are difficult to eradicate with antimicrobial therapy. The purpose of the current study was to clarify the influence of sub-inhibitory concentrations (sub-MICs) of daptomycin and tigecycline antibiotics on biofilm adhesion factors and exoproteins expressions by S. aureus clinical isolates. Six clinical isolates representing positive biofilm S. aureus clones (3 methicillin-sensitive S. aureus (MSSA) and 3 methicillin-resistant S. aureus (MRSA)) were grown with sub-MICs (0.5 MIC) of two antibiotics (daptomycin and tigecycline) for 12 h of incubation. RNA extracted from culture pellets was used via relative quantitative real-time-PCR (qRT-PCR) to determine expression of specific adhesion (fnbA, fnbB, clfA, clfB, fib, ebps, cna, eno) and biofilm (icaADBC) genes. To examine the effect of sub-MIC of these antibiotics on the expression of extracellular proteins, samples from the culture supernatants of six isolates were collected after 12 h of treatment with or without tigecycline in order to profile protein production via 2D gel sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (2D gel-SDS-PAGE). Sub-MIC treatment of all clinical MRSA and MSSA strains with daptomycin or tigecycline dramatically induced or suppressed fnbA, fnbB, clfA, clfB, fib, ebps, cna, eno, and icaADBC gene expression. Furthermore, sub-MIC use of tigecycline significantly reduced the total number of separated protein spots across all the isolates, as well as decreasing production of certain individual proteins. Collectively, this study showed very different responses in terms of both gene expression and protein secretion across the various isolates. In addition, our results suggest that sub-MIC usage of daptomycin and tigecycline could signal virulence induction by S. aureus via the regulation of biofilm adhesion factor genes and exoproteins. If translating findings to the clinical treatment of S. aureus, the therapeutic regimen should be adapted depending on antibiotic, the virulence factor and strain type.

scholarly journals Etiologia e perfil de sensibilidade de bactérias isoladas de ovelhas com mastite na região nordeste do estado do Pará

2010 ◽  
Vol 30 (12) ◽  
pp. 1043-1048 ◽  
Author(s):  
Natália da Silva e Silva ◽  
José Alcides S. da Silveira ◽  
Cleyton Prado Pinheiro ◽  
Melina Garcia S. de Sousa ◽  
Carlos Magno C. Oliveira ◽  
...  
Keyword(s):  
Escherichia Coli ◽  
Staphylococcus Aureus ◽  
Citrobacter Freundii ◽  
California Mastitis Test ◽  
Santa Inês ◽  
Staphylococcus Spp

Objetivou-se com este trabalho estudar a etiologia da mastite em ovelhas na região nordeste do Pará, além de estabelecer o perfil de sensibilidade das bactérias isoladas frente a antimicrobianos. Foram examinadas 176 ovelhas da raça Santa Inês, em lactação, mantidas em sistema semi-intensivo, pertencentes a sete propriedades especializadas na criação de ovinos. Foi realizado o exame clínico da glândula mamária, o exame macroscópico da secreção láctea por meio do Teste da Caneca Telada, o California Mastitis Test (CMT), o exame microbiológico do leite e o antibiograma. Das 352 metades mamárias estudadas (176 ovelhas), 21 (5,97%) apresentaram mastite clínica, 26 (7,39%) apresentaram mastite subclínica e 305 (86,64%) metades mamárias foram negativas. A maioria dos animais acometidos pela mastite estava no terço médio da lactação, com menor número de crias e maior número de lactações. Na mastite clínica (MC) as bactérias isoladas foram Staphylococcus spp. coagulase negativo (42,9%); Staphylococcus aureus (9,52%); Streptococcus spp. (4,76%) e Escherichia coli (4,76%). As associações observadas foram Staphylococcus aureus e Streptococcus spp. (4,76%); Staphylococcus spp. coagulase negativo não hemolítica, Staphylococcus spp. coagulase negativo hemolítica e Staphylococcus spp. coagulase negativo pigmento não hemolítica (4,76%). Já na mastite subclínica (MSC), as bactérias isoladas foram Staphylococcus spp. coagulase negativo (26,9%); Staphylococcus aureus (15,4%); Streptococcus spp. (7,69%); Escherichia coli (7,69%) e Citrobacter freundii (11,5%). A associação observada foi Staphylococcus spp. coagulase negativo não hemolítica e Staphylococcus spp. coagulase negativo hemolítica (3,85%). Os antimicrobianos com maior eficácia contra os agentes isolados Gram positivos foram penicilina/novobiocina (100%), cefalotina (100%) e florfenicol (100%) e contra o Citrobacter freundii foram a ampicilina (100%) e florfenicol (100%). Já em relação a Escherichia coli, 66,7% dos isolados mostraram-se resistentes à ampicilina, cefalotina, florfenicol e tetraciclina. A mastite está presente em ovelhas no estado do Pará, havendo a necessidade de estimar, em estudos futuros, as perdas econômicas causadas por essa enfermidade. O CMT apresentou resultados satisfatórios, podendo ser recomendado como teste de triagem para o diagnóstico de casos individuais de mastite subclínica em ovinos, uma vez que apresentou boa relação com o exame microbiológico. No antibiograma foi observado que a maioria dos agentes isolados apresenta-se sensível aos diferentes antimicrobianos testados, sendo os antibióticos com melhor eficiência o florfenicol e a cefoxitina.

scholarly journals Changes in protein patterns of Staphylococcus aureus and Escherichia coli by silver nanoparticles capped with poly (4-styrenesulfonic acid-co-maleic acid) polymer

2019 ◽  
Vol 13 (2) ◽  
pp. 39-47 ◽  
Author(s):  
Hathaichanok Tamiyakul ◽  
Sittiruk Roytrakul ◽  
Janthima Jaresitthikunchai ◽  
Narumon Phaonakrop ◽  
Somboon Tanasupawat ◽  
...  
Keyword(s):  
Escherichia Coli ◽  
Staphylococcus Aureus ◽  
Silver Nanoparticles ◽  
Maleic Acid ◽  
Molecular Transport ◽  
Protein Translation ◽  
Bacterial Protein ◽  
Protein Patterns ◽  
E Coli ◽  
Sds Page

Abstract Background While silver nanoparticles (AgNPs) are increasingly attractive as an antibacterial agent in many applications, the effect of AgNPs on bacterial protein profiles, especially AgNPs stabilized by polymeric molecules, is not well understood. Objectives To investigate the changes in bacterial protein patterns by AgNPs capped with poly (4-styrenesulfonic acid-co-maleic acid) (AgNPs-PSSMA) polymer toward Staphylococcus aureus ATCC 25923 and Escherichia coli ATCC 25922. Methods The growth of bacteria after incubated with AgNPs-PSSMA for different time intervals was determined by optical density at 600 nm. Their protein patterns were observed using sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), and the proteomic analysis of extracted proteins was determined by liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC–MS/MS). Results AgNPs-PSSMA was able to inhibit the growth of both S. aureus and E. coli cells. The treated bacterial cells expressed more proteins than the untreated cells as seen from SDS-PAGE study. Nanosilver (NS) caused the upregulation of metabolic gene, waaA, in S. aureus cells. For E. coli cells, the upregulated proteins were metabolic genes (srlB, fliE, murD) and other genes dealt with DNA replication (dinG), DNA–RNA transcription (yrdD), RNA– protein translation (rplD), molecular transport (sapF), and signal transduction (tdcF). Conclusions The antibacterial effect of AgNPs-PSSMA may arise by changing the bacterial proteins and thus interfering with the normal cell function.

scholarly journals CLONAGEM, EXPRESSÃO E PURIFICAÇÃO DE UM FRAGMENTO FAB DE ANTICORPO MONOCLONAL MURINO ANTI-PBP2A DE STAPHYLOCOCCUS AUREUS RESISTENTE À METICILINA

2021 ◽  
Author(s):  
Juliana Pascarelli Compan Boechat ◽  
Felipe Rodrigues Semcovici Ramos ◽  
Haroldo Cid Da Silva Junior ◽  
José Procópio Moreno Senna
Keyword(s):  
Staphylococcus Aureus ◽  
Western Blot ◽  
E Coli ◽  
Sds Page

Introdução: Staphylococcus aureus resistente à meticilina (MRSA) é uma das principais bactérias multirresistentes. A resistência se deve principalmente a presença da proteína ligadora de penicilina 2a (PBP2a). Os fragmentos de anticorpos podem ser utilizados de diversas maneiras visando o controle deste patógeno; e a obtenção e purificação eficientes são fundamentais. Objetivo: Realizar a clonagem, expressão e a purificação de fragmentos do tipo Fab murino anti-PBP2a. Metodologia: Foi realizada amplificação das sequências de cadeia leve (CL) e Fd do Fab murino anti-PBP2a por PCR, e ligação das mesmas ao vetor de expressão pCDNA3.4. Após, foi realizada a transformação e clonagem em células de E. coli TOP10, com posterior purificação do material obtido. A orientação e a identidade dos genes clonados no vetor de expressão foram analisadas por sequenciamento nucleotídico. Células HEK293 foram transfectadas com as construções correspondentes a CL e Fd-His, com cultivo acompanhado durante 5 dias. A avaliação da expressão do Fab foi realizada por Western Blot (WB) e SDS-PAGE. O sobrenadante foi coletado para etapa de purificação que foi realizada através de Cromatografia Líquida de Afinidade por Íons Metálicos utilizando a coluna HisTrap™HP. O material alvo de purificação foi injetado à coluna cromatográfica sob fluxo constante de 2mL/min, com o tampão de eluição (20mM fosfato de sódio+0,5M NaCl 1M imizadol, pH 7,4) injetado em gradiente de 0-50% no fluxo de 3mL/min em 30 volumes de coluna. Resultados: Através do sequenciamento dos clones obtidos, determinou-se as construções que apresentavam os genes de CL e Fd na orientação correta para serem utilizados na transfecção. A avaliação da expressão por SDS-PAGE permitiu observar a presença da banda em torno de 50kDa no fim do cultivo (dia 5) e confirmada ser relativa ao Fab murino anti-PBP2a por WB. A purificação do fragmento resultou em uma amostra final com alta homogeneidade, observada em SDS-PAGE. Conclusão: O presente trabalho permitiu a obtenção do Fab com alta homogeneidade, fornecendo a possibilidade da utilização em estudos para avaliação de seu potencial terapêutico e diagnóstico, focando principalmente em inovações diagnósticas como o diagnóstico in situ de focos infecciosos de MRSA.

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