Development of a Dual PCR Method for Detection of Pasteurella Multocida and Haemophilus Parasuis

Pasteurella multocida and Haemophilus parasuis are the main pathogens of porcine respiratory disease syndrome, and often are the common pathogens of porcine pulmonary disease in collectivized pig farms. It has brought great influence on the pig industry and seriously hampered the healthy development of pigs. Therefore, the rapid detection method for Pasteurella multocida and Haemophilus parasuis is the key to its successful prevention and control. In the process of diagnosis, we need to conduct laboratory tests for confirming of preliminary diagnosis, that can be made based on the history, clinical symptoms, pathological changes of necropsy and epidemiological characteristics of the disease. Traditional diagnostic techniques, such as bacterial isolation and immunological test, are time-consuming and laborious, and are not suitable for rapid clinical diagnosis, nor for large-scale epidemiological investigation. Therefore, it is necessary to establish an accurate and rapid method to identify the two common respiratory pathogens in pigs. In this paper, Pasteurella multocida and Haemophilus parasuis were used as research objects to establish a dual PCR detection method. The main research contents are as follows: A dual PCR assay was established to detect Pasteurella multocida and Haemophilus parasuis simultaneously. By using Pasteurella multocida and Haemophilus parasuis specific primers, and adjusting primer concentration and annealing temperature, a dual PCR method for detecting Pasteurella multocida and Haemophilus parasuis was established. The rapid detection method for Pasteurella multocida and Haemophilus parasuis established in this study has high specificity and sensitivity, and can realize rapid and accurate identification of pathogenic bacteria in a relatively short period of time, providing a new technical means for rapid detection in clinical and grassroots laboratories

Кордова кров та перспективи застосування її компонентів в практиці ветеринарної хірургії

У статті наведено результати досліджень глікопротеїнів, глікозаміногліканів та церулоплазміну в плазмі крові великої рогатої худоби в динаміці загоєння післякастраційних ран, за використання інтраперитоніальних ін’єктцій сироватки кордової крові. З’ясовано вплив парентерального застосування сироватки кордової крові на показники метаболізму сполучної тканини клінічно здорових тварин та при асептичному запаленні. Кордову кров для отримання сироватки відбирали із судин пуповини під час фізіологічних родів у корів. Сироватку після центрифугування розливали по 5 мл у стерильні пластикові пробірки і піддавали кріоконсервації у морозильній камері при 18-20◦С, яку зберігали до 3-4 тижнів. Визначено рівень церулоплазміну за методикою, що ґрунтується на окисленні n-фенілендиаміну за участю даного металопротеїну. З’ясовано, що застосування інтраперитоніального введення сироватки кордової крові дозволяє обмежити руйнацію сполучнотканинного матриксу та посилює і модулює гостро фазну відповідь організму на розвиток запальної реакції.

The Mechanism of Antimicrobial Peptide MPX against Enterohemorrhagic Escherichia coli in Vitro

Escherichia coli is a facultative anaerobic bacteria that exists in the gastrointestinal tract of humans and animals. It can cause diarrhea, enteritis, destruction of the host's intestinal barrier, and intestinal microecological disturbances. In recent years, due to the abuse of traditional antibiotics, a variety of drug-resistant strains and super bacteria have emerged in an endless stream. Therefore, there is an urgent need to find new alternatives to antibiotics. Antimicrobial peptides are a type of small peptides produced when organisms resist the invasion of foreign microorganisms. They are considered to be the best alternative to antibiotics which has become a research hotspot in recent years. The antimicrobial peptide MPX is extracted from wasp venom and has a good bactericidal effect on many bacteria. To explore the effect of MPX against E. coli. The function of MPX against E. coli was detected by MIC, plate count, propidium iodide, NPN and DiSC3(5) permeability testing, immunofluorescence microscope observation, and the impact of MPX stability by temperature, pH, ion. In this study, the results found that MPX has good antibacterial activity against E. coli, and the minimum inhibitory concentration (MIC) was 31.25 ug/mL. MPX bactericidal kinetics study found that MPX had good bactericidal activity within 6 hours. Bacterial permeability studies have shown that MPX could increase the permeability of bacteria, leading to an increase in the protein content of the bacterial supernatant. In addition, NPN, PI and DiSC3(5) results showed that the fluorescence value was positively correlated with MPX. The stability test of MPX found that salt ions, temperature, pH, etc. have a slight influence on its effect. In addition, scanning electron microscopy results showed that the bacteria became smaller and the contents leaked after the action of MPX. The above results showed that MPX has a good bactericidal activity in vitro, laying the foundation for the development of new drugs for the treatment of bacterial infections.

Вивчення відтворювальної здатності кролематок гібридних кросів при використанні штучного осіменіння у комплексі з гормонотерапією в умовах приватної кролеферми

У статті подано інформацію щодо технологічного процесу штучного осіменіння кроликів (ШО): отримання сперми, оцінка якості еякуляту та його розведення, оцінка технологій введення сперми у статеві шляхи самок що були проведенні на базі приватної кролеферми, яка спеціалізується на розведенні гібридних кросів кроликів, а саме ліній HYPLUS. Ефективність ШО залежить на сам перед від якості батьківського поголів’я та методу введення сперми. Вагінальне введення є найбільш простим і найменш інвазійним методом. Перед проведенням ШО усіх тварин необхідно обстежити з метою виключення фізіологічних відхилень. За для отримання максимальних показників усіх кролиць запліднюють у період статевої охоти, синхронізація якої досягається введенням гормональних препаратів на основі сироватки гонадотропіну жеребних кобил (ГСЖК). Ефективність використання препарату визначається за допомогою зовнішнього огляду статевих органів. Для осіменіння обираються кролиці з вираженою припухлою, овальною петлею, яскраво червоного або бузкового кольору складчастість слизової оболонки якої добре виражена. Значним фактором в успішності ШО є вибір оптимального часу. Найбільш ефективним за часом осіменіння необхідно проводити не пізніше ніж за 30-60 хвилин після отримання сперми її оцінки і розведення. Оптимальна ступінь розведення сперми визначається за її якістю і густотою. Сперму у кроликів поділяють на три типи: густу, середню і рідку. Для розведення використовують різноманітні розчинники, які мають у своєму складі речовини для підтримання енергетичного балансу сперматозоїдів, буферні компоненти, солі, комплекс антибіотиків широкого спектру дії та компоненти для підтримання осмотичного тиску та стабілізації кислотності (рН). Для введення сперми використовують спеціалізовані одноразові катетери, після чого необхідне внутрішньо м’язове введення синтетичного нанопептиду, аналогу гонадотропін-релізінг гормону ЛГ-РТ-люберина для стимуляції виходу зрілих яйцеклітин з яєчників у статеві шляхи кролиці. Для одержання прибутків і швидкості відтворення поголів’я було розроблено найбільш ефективну методику відтворення з використанням гормональних засобів Фоллігон, Сергон 500 і Сурфагон за оптимальною схемою і дозами, та використання напів щільних окролів для максимальної ефективності і недопущення виснаження маточного поголів’я.

Моніторинг різних форм маститу у господарствах Сумської області

В статті викладені результати моніторингу маститу корів у Сумській області. Мастит, спричинений інфекційними збудниками, досі вважається згубним для молочних тварин, впливає на їх добробут, а також несе величезні економічні збитки молочній галузі через зниження продуктивності та збільшення вибракування. Дослідження проводили на молочних фермах Сумської області. Процедури поводження з тваринами в рамках дослідження були затверджені Комітетом з етики Сумського національного аграрного університету. Тварин утримують у вільних стійлах. Доїння відбувається тричі на день. Досліди проводили на коровах у 1-5 лактації, що належали до стада голштинської породи великої рогатої худоби. В результаті проведення досліджень було встановлено, що субклінічні форми маститу у молочних господарства виявляються набагато частіше, ніж клінічні. Захворювання корів на субклінічний мастит контролювали за кількістю соматичних клітин (КСК) у молоці. Найчастіше корови уражуються на субклінічний мастит (СМ) у перші місяці після отелення через виникнення фізіологічного стресу у тварини. Захворювання поступово зменшуються під кінець періоду лактації і знову виникає рецидив в період запуску. Однак у здорових корів кількість соматичних клітин в молоці може коливатись протягом всього періоду лактації в межах фізіологічної норми. У хворих тварин КСК різко збільшується і може переходити мастит з субклінічної форми у клінічну через ненадання своєчасного лікування. При проведенні моніторингу маститу різної форми у корів в господарствах Сумської області встановлено, що субклінічна форма маститу діагностувалась частіше ніж клінічна у Сумському районі на 33,4 %; у Лебединському – на 17,8 %; у Конотопському – на 45,4 %; у Шосткінському – на 42,8 %; у Роменському – на 34,3 %; у Охтирському – на 21,9 %. Встановлено, що пік розвитку субклінічного маститу приходиться на 7-10 добу запалення і повертається до початкових значень за два тижні. За результатами визначення основного складу мікрофлори у молоці корів встановлено, що основними збудниками субклінічного маститу є S. agalactiae (20 %), S aureus (17 %), S. epidermidis (15 %), E. fecalis (12 %), E. coli (10 %), Mycoplasma spp. (8 %), гриби Candida (7 %) та асоційована мікрофлора (11 %).

Effect of Rheology of Blood and Haemostasis of the Cows on the Viability of the Offspring and Reproduction

The Results of the studies indicate that in 45.44% of cows-the initial duration of the third period of genera was more than 9 hours, and in cows of the second - third lactation only in 27.28% of animals. Morphometry indicators of a body mass of newborns calves and placenta show the conditions of growth and development of fetal, which are connected with functional activity of the feto-placental complex and on average, the body weight of the calves of the first subgroups (animals derived from cows with the duration of the third period of genera up to six hours) proved by20.80%-21.20% more than the calves of the fourth subgroups. Below the mass proved and placenta of calves, fourth subgroups (in 1.25 by Times – 1.18 by Times, (P < 0.05), compared to this indicator of the first subgroups of calves. Increased activity of the factors of hemostasis and rheology of blood is set in animals in which the duration of time of the third period of genera was up to 12 and more hours. Under these conditions, the viscosity of animal blood in 1.39-1.40 by Times, (P < 0.05) and 1.30-1.40 by times (P < 0.05), the content of Fibrinogen in 2,47-2,04 by Times<0.01). The given data indirectly indicate the increase of blood viscosity, reduction of its blood flow, especially in the capillary system vessels. In our opinion, this is the cause of the birth of animals with low viability as evidenced by the coefficients of the catabolism factor, oxygenic homeostasis, samples of Mack Klur Aldrich, "immature" surfactant system. Recovery of the reproductive function of cows after calving and duration service period in animals of the first subgroups was in 1.17 – 1.14 by times shorter than in cows of the fourth subgroups

Гістоархітектоніка лімфоїдних утворень слизової оболонки тонкого кишечника мускусних качок

Особливості морфогенезу лімфоїдних структур кишечника свійської птиці, зокрема в період від народження до настання фізіологічної зрілості, коли відбувається інтенсивне формування імунної системи, необхідно враховувати в інтенсивному птахівництві, що визначає широке використання біологічних препаратів з активною антигенною дією. Від здорових не вакцинованих качок відбирали дванадцятипалу, порожню та клубову кишки, досліджували за загальними методиками: макро-мікроанатомію і топографію лімфоїдних структур слизової оболонки тонкої кишки, проводили за методикою Hellman, парафінові гістологічні зрізи забарвлювали гематоксиліном Ерліха та еозином, азур II-еозином та імпрегнували сріблом за Футом. Вік піддослідних качок: 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210 та 240 діб. Встановлено, що морфо-функціональна диференціація та спеціалізація лімфоїдних утворень тонкої кишки має вікові та регіональні особливості, відбувається в певній послідовності. В слизовій оболонці дванадцятипалої та клубової кишок качок з 25-добового віку паралельно з дифузною лімфоїдною тканиною відбувається формування ретикулярної строми лімфатичних вузликів. У зрілому (реактивному) вузлику, зародковому центрі та периферійній частині чітко виділяються мантія, що складається, переважно, з дрібних лімфоцитів. Характерно, що кількість і розмір вузликів збільшується з віком. Ретикулярна сітка лімфатичних вузликів при цьому розріджується, до її часткового витончення, а в подальшому й фрагментації.

Definition of efficiency therapeutic and preventive measures against infectious diseases of bees when installing in a nest of bees frames contaminated with american foul brood pathogen (Bacillus larvae)

European Union law requires the destruction of all infected hives and equipment. In the United States, many state apiary inspectors require that a diseased AFB hive be completely burned. Spores can persist for up to 40 years and are difficult to destroy. A less radical method of curbing the spread of the disease is to burn only the frames and ridges (honeycomb tongues), as well as careful flame heating of the inner part of the hive body, bottom, hive flaps and lids. Immersion of parts of the hive in hot paraffin or 3% sodium hypochlorite solution (bleach) also makes AFB spores harmless. It is also possible to sterilize an infected hive without damaging either the structure of the hive or the supplies of honey and pollen it contains, by prolonged exposure to an atmosphere of ethylene oxide, both in a closed chamber and in hospitals when sterilizing equipment. which do not withstand steam sterilization. Pathogens are sensitive to many antibiotics of the tetracycline group, streptomycin, erythromycin, and other sulfonamide drugs (except M. plutonius), nitrofurans, and others. Antibiotics in the case of unstable strains of the pathogen can prevent the vegetative state of bacteria. Drug treatment to prevent successful germination and reproduction of American rot spores is possible using oxytetracycline hydrochloride (terramycin). Nowadays, antibiotic therapy is quite effective in use, but at the same time they are banned in the beekeeping industry, so antibiotic residues can be found in bee products, which in turn can be harmful to human health. Therefore, we have developed the drug "Apichels", which in previous studies has proven itself in the use against varroasis of bees in the spring. This drug has proven to be not only effective in use, but also quite carefree for both bees and humans, this is the basis of our previous research on the toxicity of bee products during the use of the drug, due to the components of its composition. All components are of plant origin, which is not included in the components that are prohibited and harmful to bees and humans. Thus, we decided to test this tool for effectiveness in preventive methods against American bee rot.

Design of antigen synthesis and preparation and characterization of specific and eurytopic antibodies against B-group aflatoxins

The aim of this study was to prepare B-group aflatoxins(BGAFs) antibody with strong specificity and good eurytopicity. According to the molecular structure and active site of aflatoxin B1 (AFB1), the BGAFs artificial antigen AFB1-BSA was prepared by 6 methods such as oxime active ester(OAE)，methylation of ammonia(MOA)，mixed anhydride(MA)，semi acetal(SA)，epoxide(EP) and enol ether derivative(EED) and identified by UV and SDS-PAGE. Polyclonal antibodies against AFB1(AFB1 pAb) were prepared by immunizing New Zealand rabbits with AFB1-BSA, and the titers of AFB1 pAb was detected by indirect ELISA, the sensitivity of AFB1 pAb was analyzed by indirect competitive ELISA(icELISA) and the specificity and eurytopicity of AFB1 pAb was analyzed by cross-reactivity(CR) test. The results showed that AFB1-BSA was synthesized successfully and the best one was OAE method among 6 synthesis methods of BGAFs artificial antigen and its conjugation ratio of AFB1 to BSA was about 8.46∶1. The immune efficacy of OAE method was the best, its AFB1 pAb had high titers of 1∶（1.28×104） by indirect ELISA, a good sensitivity with the 50% inhibition concentration(IC50) of 10.32 μg/L to AFB1 by icELISA and a high CR to AFB2 of 75.21%, AFG1 of 44.13%, AFG2 of 14.72%, AFM1 of 16.36% and AFM2 of 1.44%, respectively. In this study, AFB1 pAbs with high titer, sensitivity, specificity and eurytopicity were prepared, which laid a matter and technical foundation for the establishment of BGAFs immunoassay.

Патоморфологічні зміни в організмі телят при протозоозах, заходи профілактики

За результатами ряду досліджень встановлений широкий спектр розповсюдженості протозоозів серед тварин, це питання розкривається в даній статті. Територіальне розташування Сумської області на Півночі України має особливі природно-кліматичні зміни, а це є одним із факторів виникнення та розповсюдженості криптоспоридіозу серед тварин. Криптоспоридіоз телят має широке розповсюдження в господарствах Сумської та Чернігівської областях. Екстенсивність інвазії у різних районах коливається від 12,4 % до 81,4 % та в середньому складає 41,23 % від обстеженого поголів’я. В різних територіально кліматичних зонах розташування господарств при обстеженні був майже однаковий рівень ураженості телят від 39,3 % до 81,4 %. При обстежені хворих тварин був виявлений збудник Cryptosporidium parvus. Термін ураженості та розвиток інвазії у новонароджених телят залежить прямо-пропорційно від їх утримання та сезонності. Починаючи вже з четвертої доби від народження реєструється виділення ооцист. Максимальна кількість спостерігається на сьому добу і показник складав 50,8 + 0,47 % в зимовий період та від 29,6 + 0,25 % до 42,8 + 0,31 % в літню пору року.При ураженості криптоспоридіями у телят спостерігається два піка екстенсивності інвазії. Перший реєструється на п’ятий день з початку виділення збудника. На сьому добу встановлюється друга хвиля виділення ооцист. Тривалість виділення ооцист Cryptosporidium у телят складає до 21 доби від народження. Ветеринарно-санітарні умови утримання тварин відіграють значну роль у розповсюдженні збудника криптоспоридіозу серед сприйнятливого поголів’я. Накопичення ооцист у зовнішньому середовищі, обумовлює постійна його циркуляція у тваринницьких приміщеннях по утриманню новонароджених телят. При гематологічному дослідженні встановлена екстенс-ефективність препаратів кокцидіостатиків при комплексному застосуванні. При їх використанні в крові тварин, які підлягали лікуванню, збільшується кількість гемоглобіну, еритроцитів. Рівень лейкоцитів та показники лейкограми відповідають фізіологічній нормі в процесі видужання. При лабораторній діагностиці використовували модифікований метод сегментації в розчині поверхнево-активних речовин. В якості засобів, які гальмують розвиток збудника, використовували комплексно препарат вітчизняного виробництва Бравітакокцид в дозі 1,5 г/10 кг маси тіла з вітаміном В1 та поєднували з препаратами, які стабілізують обмін речовин в організмі тварин.. Особливу увагу приділяли підготовці приміщень з утримання новонароджених телят, з попереднім дослідженням в лабораторних умовах, змивів з стін, станків, предметів побуту, на забрудненість ооцистами збудника C. Parvum та інших представників інвазійних збудників.