On the Expression of Several Lhc Genes in Garden Cress (Lepidium sativum L.)

1994 ◽  
Vol 49 (11-12) ◽  
pp. 802-810 ◽  
Author(s):  
Harald Brunner ◽  
Wolfhart Rüdiger

The polymerase chain reaction was used to prepare gene-specific probes for several Lhc genes coding for chlorophyll a/b-binding proteins of cress (Lepidium sativum L.). Due to the presence of about 150 basepairs of the coding region, the isolated clones could be attributed to Lhc a3 (1 clone), Lhc b1 (5 clones), Lhc b2 (1 clone) and Lhc b3 (1 clone) genes. Probes prepared from the 3′ non-coding regions of the clones did not cross-hybridize; they were specific for 3 different Lhc b1 transcripts and one each of Lhc b2, Lhc b3 and Lhc a 3 transcripts. The transcript levels were higher in leaves than in cotyledons of light-grown seedlings; they decreased significantly in cotyledons from week 1 to week 4. The levels of 2 Lhc b1 transcripts (detected with probes cd 1 and cd 2) changed from 1 week old cotyledons (30% c d l, 28% cd 2) to 3 months old leaves (14% c d l), 44% cd 2), stems (11% c d l, 56% cd 2) and fruits (15% cd 1, 62% cd 2, all values percent of total transcripts), whereas transcript levels of another Lhc b1 gene (detected with probe cd 3) and of a Lhc a 3 gene remained nearly constant. The level of Lhc b2 and Lhc b3 transcripts were 1 - 2 orders of magnitude smaller than those of the other Lhc transcripts. The data obtained with cress plants are compared with published data from other plants.

Author(s):  
Nicholas Laughton

Wilms’ tumour is a pediatric tumour of the kidney that appears to be the result of abherrent embryonal renal development. The paired­box (PAX) gene family has previously been implicated in Wilm’s tumorogenesis. In this study, Nickel­Agarose Chromatin Enrichment (NACE) was used to identify genes whose expression is regulated by the ranscription cofactor Pax2. Of the genes identified by NACE, the extracellular signal metabolite WNT5A was chosen fro further study. The expression of WNT5A was measured in a set of tumour samples using quantitative real time polymerase chain reaction (qRT­PCR) and compared to a human fetal kidney control. Of the 38 samples tested, 76% showed significantly lower levelsof cytosolic messenger RNA (mRNA). This data, in conjunction with published data on Pax2 expression, suggests Pax2 inhibits the expression of WNT5A. When compared with histological reports for the tumours we examined, the expression data implies that WNT5A may have a role in regulation of tubule growth in the developing kidney


Agrikultura ◽  
2010 ◽  
Vol 21 (1) ◽  
Author(s):  
Nono Carsono ◽  
Sri Nurlianti ◽  
Inez Nur Indrayani ◽  
Ade Ismail ◽  
Tri Joko Santoso ◽  
...  

Transformasi gen Glu-1Dx5, pengendali utama karakter elastisitas dan daya mengembang adonan dari gandum, telah berhasil ditransfer ke dalam genom tanaman padi kultivar Fatmawati dengan menggunakan penembakan partikel, dengan tujuan untuk memperbaiki kualitas adonan tepung beras. Galur-galur harapan telah diperoleh, tetapi karena telah mengalami penyerbukan sendiri selama 1-2 generasi yang menyebabkan transgen mengalami segregasi, maka diperlukan upaya pendeteksian transgen pada populasi putative transgenik ini. Upaya ini dapat dilakukan, antara lain dengan menggunakan teknik Polymerase Chain Reaction (PCR) yang memungkinkan perbanyakan fragmen DNA yang spesifik (gen) secara cepat dalam jumlah banyak.  Percobaan ini bertujuan untuk mendapatkan tanaman padi transgenik yang memiliki gen Glu-1Dx5 pada dua generasi yang sedang bersegregasi. DNA genom dari 149 tanaman padi (generasi T1 sebanyak 14 tanaman, generasi T2 sebanyak 134 tanaman, dan satu tanaman non-transgenik) telah diekstraksi menggunakan Genomic DNA Purification Kit dari Fermentas. Plasmid pK+Dx5 digunakan sebagai positif kontrol, selain itu digunakan juga enzim Taq DNA polymerase dari Go Green Taq® Master Mix (Promega) dan 2 primer spesifik yang mengamplifikasi coding region dari Glu-1Dx5 (2,5 kb). Hasil percobaan menunjukkan, tanaman padi yang memiliki gen Glu-1Dx5 pada generasi T2-7 sebanyak 26 tanaman, T2-11 : 12 tanaman, T2-12 : 3 tanaman, T2-40 : 3 tanaman dan T2-45 : 5 tanaman. Seluruh tanaman generasi T1 tidak memiliki insert. Hasil ini menunjukkan bahwa gen Glu-1Dx5 sudah terintegrasi ke dalam genom tanaman padi kultivar Fatmawati dan diwariskan dari satu generasi ke generasi berikutnya.


2013 ◽  
Vol 2013 ◽  
pp. 1-6 ◽  
Author(s):  
Wan Himratul Aznita Wan Harun ◽  
Nur Alyaa Jamil ◽  
Nor Hazwani Jamaludin ◽  
Mohd-Al-Faisal Nordin

The study aimed to identify theHWP1gene in non-Candida albicans Candidaspecies and the differential expression ofHWP1following treatment withPiper betleandBrucea javanicaaqueous extracts. All candidal suspensions were standardized to1×106 cells/mL. The suspension was incubated overnight at 37 °C (C. parapsilosis, 35°C). Candidal cells were treated with each respective extract at 1, 3, and 6 mg/mL for 24 h. The total RNA was extracted and reverse transcription-polymerase chain reaction was carried out with a specific primer ofHWP1.HWP1mRNAs were only detected inC. albicans,C. parapsilosis, andC. tropicalis. Exposing the cells to the aqueous extracts has affected the expression ofHWP1transcripts.C. albicans,C. parapsilosis, andC. tropicalishave demonstrated different intensity of mRNA. Compared toP. betle,B. javanicademonstrated a higher suppression on the transcript levels ofHWP1in all samples.HWP1was not detected inC. albicansfollowing the treatment ofB. javanicaat 1 mg/mL. In contrast,C. parapsilosisandC. tropicaliswere shown to haveHWP1regulation. However, the expression levels were reduced upon the addition of higher concentration ofB. javanicaextract.P. betleandB. javanicahave potential to be developed as oral health product.


Genome ◽  
1994 ◽  
Vol 37 (4) ◽  
pp. 664-671 ◽  
Author(s):  
Lang Zhuo ◽  
S. L. Sajdak ◽  
R. B. Phillips

Intraspecific variation in the sequence of the transcribed spacer regions of the ribosomal DNA (rDNA) in lake trout was examined by restriction mapping and sequencing of these regions amplified by the polymerase chain reaction. The length of the first internal transcribed spacer region (ITS-1) was 566 bases and the second internal transcribed spacer region (ITS-2) was 368 bases in lake trout. When the 1.4-kb region including the ITS-1, the 5.8S coding region, and the ITS-2 was amplified from 12 individuals from four populations and digested with eight different enzymes only one intraindividual polymorphism was found that occurred in each population. When the amplified ITS-1 region was sequenced from an additional 10 individuals from five populations, no interindividual variation was found in the sequence. A 6-kb portion of the rDNA repeat unit including 1.6 kb of the 18S coding region, the 5′ external spacer region (5′ ETS), and part of the adjacent intergenic spacer was cloned and a restriction map was prepared for these regions in lake trout. No intraspecific variation was found in the region adjacent to the 18S rDNA, which includes the 5′ ETS, although intraspecific and intraindividual length variation was found in the intergenic spacer region 3–6 kb from the 18S. Sequencing of a 609-b segment of the 5′ ETS adjacent to the 18S coding region revealed the presence of two 41-b repeats. The 198-b sequence between the repeats had some similarity to the 18S coding region of other fishes. Primers were designed for amplification of 559 b of the 5′ ETS using the polymerase chain reaction. No intraspecific variation in this region in lake trout was found when the DNA amplified from this region in 12 individuals from four populations was digested with eight restriction enzymes.Key words: ribosomal DNA, internal transcribed spacer regions, 5′ external spacer region, transcribed spacer, lake trout.


2008 ◽  
Vol 5 (1) ◽  
pp. 81-86 ◽  
Author(s):  
Wang Xiao-Bo ◽  
Ma Chuan-Xi ◽  
Si Hong-Qi ◽  
He Xian-Fang

AbstractPolyphenol oxidase (PPO) activity is highly related to the undesirable browning of wheat-based end products. In this study, wheat PPO sequences (mRNA) were searched/BLASTed in the NCBI database and aligned using DNAMAN software. The results showed that wheat PPO genes could be divided into two clusters (I and II) and that three genes (‘i’) of cluster II seemed not to be located on chromosomes 2A and 2D. Ninety-four single nucleotide polymorphisms (SNPs) were detected between two haplotypes of the PPO gene on chromosome 2D. Eighty of these were found in the coding region (coding (c) SNPs) and 36 were non-synonymous cSNPs, which could affect the PPO amino acid sequence. Primers (STS-H) were designed at some non-synonymous cSNPs sites and were used to investigate the correlations between allelic variants and PPO activity of seeds – a total of 130 common wheat varieties were evaluated in 2 years. The results showed that STS-H could amplify a 460 bp DNA fragment in most cultivars with high PPO activity, while no PCR product was detected in most cultivars with low PPO activity. To improve the selection efficiency of a single dominance molecular marker, the multiplex polymerase chain reaction (PCR) system of STS-H and STS01 markers was also studied, based on the complementary between them.


Author(s):  
Yuki Hara ◽  
◽  
Tomonori Kawano

We previously proposed novel designs for artificial genes as media for storing digitally compressed image data, specifically for biocomputing by analogy to natural genes mainly used to encode proteins. A run-length encoding (RLE) rule had been applied in DNA-based image data processing, to form coding regions, and noncoding regions were created as space for designing biochemical editing. In the present study, we apply the RLE-based image-coding rule to creation of DNAbased animation. This article consisted of three parts: (i) a theoretical review of RLE-based image coding by DNA, (ii) a technical proposal for biochemical editing of DNA-coded images using the polymerase chain reaction, and (iii) a minimal demonstration of DNAbased animation using simple model images encoded on short DNA molecules.


1994 ◽  
Vol 42 (2) ◽  
pp. 273-276 ◽  
Author(s):  
V A Varma ◽  
C M Cerjan ◽  
K L Abbott ◽  
S B Hunter

We used in situ hybridization to specifically identify mitochondria in a series of formalin-fixed, paraffin-embedded oncocytic lesions. Digoxigenin-labeled DNA probes were generated by the polymerase chain reaction (PCR), with primers designed to amplify a mitochondrion-specific 154 BP sequence within the ND4 coding region. Probes were hybridized with mitochondrial DNA under stringent conditions. Oncocytes were strongly and consistently stained, reflecting the high copy number of mitochondrial DNA within these cells. Because of the presence of endogenous biotin within mitochondria, digoxigenin is preferable to biotin as a label for detection of mitochondria.


1996 ◽  
Vol 10 (2) ◽  
pp. 208-214 ◽  
Author(s):  
K. Ibaraki-O'Connor ◽  
K. Nakata ◽  
M.F. Young

The purpose of this study was to establish transgenic mouse lines as a tool to investigate the function of amelogenin during mineralization by causing ectopic production of amelogenin and studying its effect. The mouse amelogenin (mAme) was cloned from a 16-day-old whole mouse embryo cDNA library and was determined to be "full-length" mouse amelogenin (with a complete coding region) by comparison with the mouse amelogenin reported previously by Snead et al. (1985) and Lau et al. (1992). The overexpression construct contained: (1) the rat osteocalcin (OC) promoter (1.8 kb); (2) the adenovirus splicing casettes, including introgenic (Int) sequence (0.3 kb); (3) the full-length mAme cDNA (0.8 kb); and (4) the polyadenylation signal sequence from the pSG5 mammalian expression vector. Both Southern blotting and polymerase chain-reaction (PCR) analyses were performed, by means of a specific probe and a pair of oligodeoxynucleotides to OclntmAme(A)+, respectively. The animals which showed transgene-positive in both analyses were further used to establish F1 animals. Heterozygocity was confirmed with F1 animals by PCR analysis of DNA from the F0 x FVB/N pups. Three independent transgenic F1 heterozygous lines (640t, 706t, and 708t) have now been established. The generation of F2 homozygous lines is under way. The heterozygous transgenic animals are currently being analyzed for alterations in the morphology and structure of various bone tissues.


1990 ◽  
Vol 10 (4) ◽  
pp. 1805-1810
Author(s):  
M T Huang ◽  
C M Gorman

Polymerase chain reaction analysis was used to identify aberrant splicing of the simian virus 40 small-t intron present in pRSVcat. We examined factors governing the selection and relative use of aberrant 5' splice sites derived from the chloramphenicol acetyltransferase-coding region. Our results indicated that transcripts from virtually any cDNA positioned upstream of the small-t intron could contain alternative 5' splice sites and therefore be subject to deletions within the protein-coding region.


2021 ◽  
Author(s):  
Ιωάννης Γιαννάκης

Οι ποσότητες βιοαποδομήσιμων στερεών αποβλήτων που παράγονται από τις Εγκαταστάσεις Επεξεργασίας Λυμάτων (ΕΕΛ) αυξάνονται με την πάροδο του χρόνου συνεχώς, προκαλώντας μεγάλα προβλήματα διαχείρισης και διάθεσης τους. Το μεγαλύτερο μέρος των αποβλήτων αυτών, τα παλαιότερα χρόνια, προορίζονταν για υγειονομική ταφή. Ωστόσο λόγω των προβλημάτων ρύπανσης που επέφεραν στο περιβάλλον, επιβλήθηκαν περιορισμοί της μεθόδου αυτής και αναζητήθηκαν νέοι τρόποι διαχείρισής τους που θα αξιοποιούσαν τα θρεπτικά τους συστατικά. Μία τέτοια μέθοδο διαχείρισης αποτελεί η εφαρμογή των βιοστερεών (ΒΣ), δηλαδή των κατάλληλα επεξεργασμένων βιοαποδομήσιμων στερεών αποβλήτων που πληρούν τις απαραίτητες προϋποθέσεις για εφαρμογή με ασφάλεια στο έδαφος, ως λίπασμα αγροτικών καλλιεργειών.Κατά την παρούσα διδακτορική διατριβή, αρχικά εξετάστηκαν η επικινδυνότητα αυτής της πρακτικής σε ορισμένους οργανισμούς και γενικότερα ορισμένες από τις επιπτώσεις της μεθόδου στο περιβάλλον. Έτσι λοιπόν εκτιμήθηκε η τοξικότητα διαφορετικών τύπων ΒΣ που προέρχονται από δύο διαφορετικές ΕΕΛ και αξιολογήθηκε ο περιβαλλοντικός τους αντίκτυπος, μέσω των εκπλυμάτων τους. Καταρχάς λήφθηκαν δείγματα αναερόβιας επεξεργασμένης και αφυδατωμένης ιλύος από ΕΕΛ της Αττικής. Τα δείγματα υποβλήθηκαν στην στατική δοκιμή έκπλυσης EN 12457-2 και στη δοκιμή διαθεσιμότητας NEN 7341, κύριες φυσικοχημικές παράμετροι μετρήθηκαν στα υγρά των εκπλύσεων και εξετάστηκε η εποχικότητα αυτών των παραμέτρων. Eπιπλέον οι οργανισμοί δείκτες τοξικότητας Daphnia magna και Vibrio fischeri εκτέθηκαν σε αυτά τα εκπλύματα και υπολογίστηκαν διάφοροι δείκτες τοξικότητας. Ακόμα δημιουργήθηκαν μίγματα ΒΣ και εδάφους, σε αναλογία που προσομοιώνει εφαρμογή ΒΣ σε έδαφος αντίστοιχη με 80 tn/ha, και μετρήθηκαν οι ίδιες παράμετροι έπειτα από έκπλυσή τους με τη δοκιμή EN 12457-2. Παράλληλα λήφθηκαν, τέσσερις φορές τον χρόνο, τρία διαφορετικά είδη ιλύος από ΕΕΛ της Θεσσαλονίκης, τα οποία είχαν επίσης υποστεί αρχικά αναερόβια επεξεργασία, υποβλήθηκαν στις δύο ίδιες μεθόδους έκπλυσης και μετρήθηκαν αντίστοιχα φυσικοχημικές και οικοτοξικολογικές παράμετροι με χρήση των οργανισμών-δεικτών Daphnia magna, Vibrio fischeri, Sorghum saccharatum, Sinapis alba και Lepidium sativum. Επιπροσθέτως, εξετάστηκε η εκπλυσιμότητα μετάλλων τοξικολογικής σημασίας στα δείγματα αυτά (και για τις δύο μεθόδους έκπλυσης) και πραγματοποιήθηκαν συσχετίσεις μεταξύ των μετρούμενων παραμέτρων. Οι ίδιες μετρήσεις και διαδικασίες ακολουθήθηκαν έπειτα από εφαρμογή δύο εκ των τριών ΒΣ σε αναλογίες 0, 20 και 40 tn/ha, σε δύο αγρούς που καλλιεργούταν αραβόσιτος. Συνολικά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι τα δείγματα ΒΣ παρουσίασαν σχετικά μεγάλη μεταβλητότητα των μετρούμενων παραμέτρων. Ωστόσο σε καμία περίπτωση εφαρμογής τους στο έδαφος δεν προκάλεσαν τοξική απόκριση στους μετρούμενους οργανισμούς και είτε δεν επηρέασαν την εκπλυσιμότητα των μετάλλων τοξικολογικής σημασίας είτε την επηρέασαν σε πολύ μικρό βαθμό χωρίς να υπερβαίνονται τα επιτρεπτά όρια (Cd). Καταλήγοντας κρίνεται ότι αν και η εφαρμογή των ΒΣ αύξησε την εκπλυσιμότητα νιτρικών και νιτρωδών ιόντων, έπειτα από αξιολόγηση όλων των μετρούμενων παραμέτρων η αύξηση αυτή θεωρείται χαμηλού περιβαλλοντικού κινδύνου.Εν συνεχεία, εκτιμήθηκε η δυνατότητα των ΒΣ να χρησιμοποιηθούν ως οργανικά λιπάσματα που ταυτόχρονα θα ενισχύσουν την ανάπτυξη των φυτών και θα δράσουν ως φυτοπροστατευτικά μέσα έναντι φυτοπαθογόνων μικροοργανισμών. Για τον σκοπό αυτόν αναμίχθηκαν τύρφη και/ή δύο είδη εδάφους με τύπο ΒΣ που χρησιμοποιήθηκε προηγουμένως, σε ποσότητες των 0, 80 και 160 tn/ha και εξετάστηκε η ανάπτυξη φυτών τομάτας και η απόκριση έπειτα από μόλυνσή τους με τον φυτοπαθογόνο μύκητα Fusarium oxysporum f. sp. radicis-lycopersici (Forl), σε συνθήκες εργαστηριακές και αγρού μέσα σε δικτυοκήπιο. Από τα αποτελέσματα φάνηκε ότι τα φυτά τομάτας ευνοήθηκαν από την εφαρμογή των ΒΣ, καθώς αναπτύχθηκαν περισσότερο και παρουσίασαν ηπιότερους δείκτες ασθένειας. Μετέπειτα, έγινε προσπάθεια να αναδειχτούν περαιτέρω οι αιτίες για τις οποίες τα ΒΣ έδρασαν στα φυτά τομάτας ως φυτοπροστατευτικά απέναντι στον Forl. Έτσι εξετάστηκε εάν η προσθήκη ΒΣ θα μπορούσε να ενισχύσει τις αμυντικές αποκρίσεις φυτών τομάτας, είτε εκφράζοντας γονίδια στο φυτό, τα οποία σχετίζονται με την αντοχή στα παθογόνα, είτε δρώντας ως θρεπτικό υπόστρωμα σε μικροοργανισμούς που ζουν στο έδαφος και δρουν ανταγωνιστικά με την ανάπτυξη του παθογόνου. H ανάλυση έκφρασης γονιδίων σε φύλλα τομάτας αξιολογήθηκε με ποσοτική Αλυσιδωτή Αντίδραση Πολυμεράσης Αντίστροφης Μεταγραφής (Quantitative Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction, RT-qPCR) και τα γονίδια αντοχής που μελετήθηκαν ήταν τα GLUA, CHI3, PR1-a, LOX και AOC. Η βιοποικιλότητα των μικροοργανισμών στα υποστρώματα ανάπτυξης των φυτών της τομάτας εξετάστηκε μέσω μεταγονιδιωματικής ανάλυσης. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η προσθήκη των ΒΣ, στα υποστρώματα ανάπτυξης των φυτών, οδήγησε στην επαγωγή υψηλότερων επιπέδων έκφρασης των ανωτέρω γονιδίων και ευνόησε την ανάπτυξη κλάσεων βακτηρίων όπως τις Anaerolineae και Clostridia που δρουν ευεργετικά για το φυτό και ενδεχομένως περιορίζουν την επέκταση του Forl. Συνολικά τα ευρήματα αυτά υποδεικνύουν ότι ο συγκεκριμένος τύπος ΒΣ μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως οργανικό λίπασμα και να ενισχύσει την αντοχή του φυτού τομάτας έναντι του Forl. Εν κατακλείδι, κρίνεται ότι η εφαρμογή του τύπου ΒΣ που μελετήθηκε για λίπανση φυτών τομάτας ευνοεί την ανάπτυξη φυτών τομάτας, έχει μικρό περιβαλλοντικό ρίσκο και για τους λόγους αυτούς προτείνεται η αξιοποίησή του στη γεωργία ενισχύοντας τις αρχές της κυκλικής οικονομίας και παρέχοντας μία βιώσιμη λύση στο πρόβλημα διαχείρισης των αποβλήτων αυτών.


Sign in / Sign up

Export Citation Format

Share Document